摘要
本研究以喜树为材料，对其叶片中喜树碱(CPT)和10-羟基喜树碱(HCPT)的动态变化以及从喜树叶中提取纯化喜树碱的工艺进行了研究。 1.喜树叶片中CPT和HCPT的动态变化研究1)不同月份喜树叶中喜树碱和10-羟基喜树碱含量的动态变化以缙云山麓同一株喜树植株为材料，研究了不同月份喜树嫩叶和成熟叶片中喜树碱和10-羟基喜树碱的变化规律，结果表明：嫩叶和成熟叶片中喜树碱和10-羟基喜树碱的变化规律有较大的差异，嫩叶中喜树碱和10-羟基喜树碱含量分别在7月和5月下旬达到最大值；而成熟叶片中则分别为9月和4月下旬。 2)不同光照条件对喜树幼苗光合作用和喜树碱含量的影响以一年生喜树幼苗为材料，研究了遮荫处理对喜树光合作用和喜树碱积累的影响，结果表明：遮荫处理有利于喜树幼苗中喜树碱的积累，喜树碱含量随着光强的减弱而提高。 2.喜树叶中喜树碱提取纯化工艺研究1)在从喜树叶提取喜树碱的研究中，分别比较了不同提取溶剂、不同提取方法、超声时间、提取次数以及萃取溶剂对提取效果的影响。结果表明：70％的乙醇超声提取30min效果较好，超声提取两次即可，最佳的萃取溶剂为氯仿。 2)在喜树碱的纯化工艺上对大孔吸附树脂和硅胶柱层析分离喜树碱的效果进行了比较，经过一次纯化，分别使喜树碱浸膏的纯度从0.66％提高到11.05％和10.8％，回收率分别为55.3％和95.5％。 3)用高速逆流色谱(HSCCC)技术，采用正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水=3.5：6.5：3.5：6.5为溶剂系统，将经过硅胶柱层析纯化的喜树碱浸膏进行精制，一次分离使喜树碱浸膏的纯度提高到98％，同收率达到95％。 4)对HSCCC 精制后的喜树碱样品进行了生物活性检测。结果表明：经过HSCCC精制的喜树碱样品能诱导Hela细胞凋亡，其IC<,50>值为16.7ng·mL<'-1>，与喜树碱标准品的IC<,50>值(16.7ng·mL<'-1>)完全相同。
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