摘要
猪脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)引起的以仔猪脑炎、心肌炎或心肌周围炎症和母猪繁殖障碍为主要临床特征的急性传染病，开展EMCV预防用生物制品研究具有重要的现实意义。本研究以我国EMCV分离毒株为材料，进行了制苗用毒株的鉴定，病毒灭活工艺，疫苗制备和小鼠的免疫效力试验，为EMCV灭活疫苗的研制和开发奠定了基础。 采用蚀斑技术对EMCV分离株BJC3进行了克隆纯化，并对纯化后的毒株进行了鉴定和生物学特性分析。结果表明，纯化病毒对BHK-21细胞具有良好的适应性，传代对病毒滴度无显著影响；优化培养条件后，病毒滴度最高可达10<'-8.6> TCID<,50>/0.1mL；纯化病毒对热较敏感，冻融对其影响不大。按照优化条件培养纯化病毒，建立了种毒库。 对灭活疫苗生产用灭活剂进行了筛选，并探讨了疫苗制备工艺。结果表明，1:4000的甲醛可在37℃ 20 h内使EMCV完全灭活；0.2 mol/L，的BEI可在30℃ 20 h内使EMCV完全灭活。用以上两种灭活剂制备的EMCV灭活疫苗均可诱导小鼠产生较高的抗体水平，并能抵抗EMCV强毒攻击，且两者差异不显著(P>0.05)。利用油乳剂，按3:5的水相与油相比例制备出EMCV双相油佐剂灭活疫苗。 制备了4批EMCV双相油佐剂灭活疫苗，经检验符合生物制品无菌检验规程的要求。在小鼠和哺乳仔猪上进行了EMCV灭活疫苗的安全性试验，在高剂量免疫后，免疫动物均无死亡和其他不良表现，表明该疫苗对受试动物安全可靠，无副作用。小鼠的免疫效力检验表明，0.1 mL/只免疫一次即可获得较好的保护效果，二次免疫后抗体水平显著升高；当中和抗体效价大于1:32和/或特异性抗体EIASA效价大于1:320时，保护率为100%。
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