摘要
目的： 1、研究分析早发冠心病患者的传统危险因素、脂类代谢情况、冠状动脉病变特点。 2、研究散发早发冠心病患者中MEF2A Exon 7和Exon 11以及ACE 16Intron基因突变情况。 3、进一步研究不同早发冠心病家系遗传特点，进而明确MEF2A和ACE基因突变与早发CAD的相关性。 4、研究早发冠心病患者中eNOS和ET-1水平的改变，进而明确内皮功能异常与早发CAD发病之间的联系。 5、研究不同相关脂蛋白对内皮细胞MEF2A表达水平的影响。 6、构建MEF2A真核表达载体，并明确该表达载体在细胞中能进行相应蛋白表达。 方法： 1、收集临床资料，血管造影结果，对早发冠心病患者、非早发冠心病患者和非冠心病患者的传统危险因素、脂类代谢情况、冠状动脉病变特点进行统计分析。 2、在基因水平，采用片断长度多态性和直接测序的方法对所有研究对象(包括家系及散发病例)ACE 16Intron和MEF2A Exon 7和Exon 11的突变情况进行分析。 3、在蛋白水平，采用ELISA方法对所有研究对象外周血中eNOS水平和ET-1水平进行检测。 4、在mRNA水平，采用实时荧光定量反转录PCR方法研究不同浓度LDL、HDL对内皮细胞MEF2A表达水平的影响。 5、在细胞水平，采用质粒构建、真核细胞转染的方法明确特定MEF2A片断在真核细胞中表达状况。 结果： 1、早发CAD临床特点：①传统危险因素显著少于非早发CAD；②吸烟和阳性家族史比率显著高，高血压比率显著低；③TG水平显著高；④以急性冠脉综合症起病为主，并且以单支血管受累为主；⑤病例平均病变积分较低，轻度病变比率较高。有统计学意义。 2、以非早发CAD病例为参照，对早发CAlD进行冠心病传统危险因素Logistic回归发现早发CAD病例中阳性家族史对导致疾病起显著作用，吸烟起很重要的作用。 3、成功收集早发冠心病大家系2个，小家系3个。 4、在我国汉族人群中，MEF2A Exon 7基因变异与早发CAD没有相关性。 5、MEF2A Exon 11上发现有5个多态性位点：①1258～1290(cAG)n(n=4～11)，其CAG重复数的改变对早发CAD的发生可能没有作用；②1291～1293CCG/-，其DD/DW基因型和D等位基因与CAD尤其是早发CAD的发生有关；③1303C/T为新发现的位点，在既往研究中从未报道；④1305G/A，其多态性与早发CAD没有相关性；⑤1353G/T，其TT基因型和T等位基因对早发CAD和CAD的发生有关。MEF2A Exon 11的1291～1293CCG/-，1305G/A和1353G/T三个位点各组间的分布均存在连锁不平衡或强不平衡。1291～1293 CCG D+1305 G+1353T单倍型对早发CAD的发生明显相关。 6、ACE 16Intron I/D多态位点的DD基因型和D等位基因与CAD的发生有关，但其与早发CAD的关系有待进一步扩大样本量证实。 7、在PCADLG01家系中，MEF2A Exon 11的1291～1293CCG/-DW杂合突变型和1353 G/T的TT纯合突变很有可能是导致其众多家系成员发生早发CAD的病因。然而MEF2A Exon 11和ACE 16Intron的突变在另外几个家系中没有明显相关性。 8、eNOS水平：①早发CAD组<非早发组<正常对照组，有显著差异；②其与病变严重程度和病变血管支数呈负相关，但是未达到统计学显著意义；③与吸烟状态呈显著负相关；④去除吸烟的混杂因素后，eNOS水平在三组间仍然有显著差异(早发CAD组<非早发组<正常对照组)。 9、ET-1水平：①早发CAD组>非早发CAD组和正常对照组，有显著差异；②非早发组>正常对照组，但未能达到统计学显著差异；③其与病变严重程度和病变血管支数呈正相关，但未达到统计学显著意义。 10、eNOS水平和ET-1水平的关系：呈负相关性，有统计学意义。 11、体外细胞学实验，用荧光定量RT-PCR检测MEF2A表达水平：①证实荧光定量RT-PCR是一种新的更为灵敏、高效的研究手段来探讨危险因素对心血管系统相关基因表达的影响；②人脐静脉内皮细胞中MEF2A的表达显著高于外周血细胞；③LDL刺激能显著降低人脐静脉内皮细胞MEF2A基因的表达水平，HDL作用与其相反。作用内皮细胞6 h和12 h此效果不显著，24 h后明显，该作用呈明显的剂量依赖性。 12、成功构建的MEF2A真核表达载体在内皮细胞等细胞中均可以表达。 结论： 1、本实验从临床水平观察到：较非早发CAD，早发CAD的传统危险因素较少，吸烟、冠心病阳性家族史和TG水平升高可能在其发生过程中起了很重要的作用。早发CAD往往发病较急，侧支循环来不及建立，预后较差。 2、本实验从基因水平发现：国外已报道的MEF2A Exon 7多态性位点与在我国汉族人群早发CAD的发生无明显相关；但MEF2A Exon 11多个多态性位点与早发CAD的发生明显相关；ACE 16Intron的多态性与CAD的发生明显相关，但是与早发CAD的关系有待进一步扩大样本量证实。早发CAD在不同人群，不同家系中具有遗传异质性。 3、本实验从血清学水平观察到：早发CAD组eNOS较低，ET-1水平较高，内皮功能失调很可能是引起早发CAD的病理基础。 4、LDL、HDL除了在脂质代谢中起作用外，还可能会影响MEF2A基因的表达。 5、可以将MEF2A载入到真核表达载体，并在内皮细胞中表达，将来完全可以以此方法对不同变异基因型MEF2A致早发CAD机制进行研究。
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