摘要
深圳市科技局课题(200204176)目的和意义乙肝扶正排毒胶囊是治疗慢性乙型病毒性肝炎的中药复方制剂。三氧是由三个氧原子组成的(O<,3>)，具有强氧化性，有很强的免疫诱导和免疫杀伤作用。医用三氧是三氧与纯氧的混合气体。本课题以大型动物犬作为研究对象，研究中药乙肝扶正排毒胶囊联合医用三氧对四氯化碳(CCl<,4>)致犬急性肝损伤的影响，用实验医学的方法揭示了两者联合应用对肝脏的保护作用，从药效学的角度为乙肝扶正排毒胶囊联合医用三氧的临床应用提供了可靠的依据。 方法 1药物与仪器乙肝扶正排毒胶囊：根据杨运高教授经验方研制的中成药非标制剂齐墩果酸片：广东南国药业有限公司生产医用三氧发生器：德国生产，经我国FDA注册批准医用. 2 模型一次性腹腔注射50.0％(W/W)CCl<,4>花生油溶液，0.9ml/kg体重，建立犬急性肝损伤模型。 3 分组和给药 取家犬24只，随机分为4组，每组6只，分为模型(Model)组、齐墩果酸(OAT)组(齐墩果酸片，10mg/d·kg体重，口服)、乙肝扶正排毒胶囊(YC)组(乙肝扶正排毒胶囊，0.2g/d·kg体重，口服)、联合用药(YC+O<,3>)组(乙肝扶正排毒胶囊，0.2g/d·kg体重，口服；三氧与纯氧混合气体，三氧浓度20μg/ml，150ml/次·只，隔天一次，直肠吹注)。OAT组、YC组、YC+O<,3>组分别给药30天(三氧给药15次)。模型组及其它三组(末次给药后第二天)，均一次性腹腔注射50.0％(W/W)CCl<,4>花生油溶液，0.9ml/kg体重，造成急性肝损伤模型。予普通饮食，食欲较差时予补液治疗。 4 观察、检测指标4.1 全身情况的观察观察造模前后犬的全身情况，即精神、饮食、活动度、大小便等变化。 4.2 生存时间精确到小时(h)4．3血液生化指标的测定分别于造模前及造模后24h、2d、3d、4d、7d、14d采血，由南方医院检验科测定肝功(ALT、AST/AST、TBIL)、凝血酶原时间(PT)、血氨(AMMO)、肾功(BuN)。 4.4组织学检查造模前肝组织活检证实无病变。造模后，动物死亡时或存活15天时，采取肝脏组织，以10％甲醛溶液固定和石蜡包埋制成切片，HE和Gomori银染色，光镜下观察。 5．统计方法 用统计软件SPSS 12.0，生存分析用Kaplan Meier法，数据以均数±标准差表示(X±s),组间及组内数据比较均用Independent-Samples Tests检验。α=0.05为检验的显著性水准。 结果 1犬全身情况造模前，各组犬精神状态良好，对外界反应灵敏，毛色有光泽，饮食正常，大便成形，黄褐色，小便正常。造模后，各组犬均立即出现呕吐及平衡力失调。除YC+O<,3>组以外，其它三组中部分犬在头4d内表现为懒动、喜独处或烦躁、来回走动，部分犬表现不同程度的精神食欲较差、尿黄。YC+O<,3>组中除2只犬出现尿黄，其它犬全身情况与造模前后比较无明显改变。 2 生存分析 分别用三种方法Log Rank、Breslow 和Tarone-Ware检验四组的生存率：三种检验方法YC+O<,3>组与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05)；其他各组两两比较差异均无显著性意义(P>0.05)。结合四组的生存曲线，表明乙肝扶正排毒胶囊联合医用三氧预防性治疗能显著提高CCl<,4>急性肝损伤实验犬的生存率。 3 血液生化指标对于除AST/ALT外的各项指标：造模前后，模型组各指标均表现为先升高后恢复的趋势。(1)造模前：四组比较，各指标组间差异均无显著性意义(P>0.05)。(2)造模后：模型组分别与其他三组比较，AIT、TBIL、PT、AMMO值差异有显著性意义(P<0.05)，模型组较其它三组高；YC组与YC+O<,3>组第4d的BUN值均较模型组高，差异有显著性意义(P<0.05)。YC组与OAT 组比较，ALT值差异有显著性意义(P<0.05)，YC组较OAT 组高；YC+O<,3>组与OAT 组比较，ALT、TBIL、PT、AMMO值差异有显著性意义(P<0.05)，OAT 组ALT、TBIL、PT值较YC+O<,3>组高，YC+O<,3>组AMMO值较OAT组高。 对于AST/ALT值，造模后24h模型组和YC组均小于1.0，之后又显著升高(AST/AIT>1.5)，以模型组升高较为明显，3.4d又降到0.5以下。5.14d模型组持续下降，至第14d降至0.1；而YC组在第4d以后又开始回升，至第14d又升至略大于1.0。OAT组造模后第24h AST/AIT值在1.5-2.0之间，之后开始下降至0.5左右，第7d后又回升，至第14d升至1.0。YC+O<,3>组的AST/ALT 值维持在1.0以上。 4 肝脏组织学检查正常肝组织镜下可见肝细胞索结构清晰，肝小叶结构正常，未见肝细胞变性、坏死等病理变化，网状纤维结构正常。 模型组镜下可见(1)中央区亚大块坏死、出血，假小叶形成，坏死区充满脂肪小泡，假小叶周边脂肪变性，坏死区炎细胞浸润、网状支架塌陷；(2)肝细胞桥状坏死、出血，中央区胆小管增生、胆栓形成、胆色素沉积，门管区胆汁淤积，坏死区网状支架塌陷；(3)肝细胞水泡变性、点状坏死；(4)门管区碎屑状坏死，炎性细胞溅出，嗜酸性小体形成。 OAT组和YC组镜下可见(1)肝细胞灶性坏死，坏死区网状纤维塌陷；(2)门管区碎屑状坏死，炎性细胞溅出；(3)大面积脂肪变性。YC+03组镜下可见肝细胞点状坏死，少量脂肪变性。 结论 实验结果显示，乙肝扶正排毒胶囊联合医用三氧对急性肝损伤模型犬的作用主要体现为几个方面：(1)降低模型犬黄疸、肝性脑病的发生率，促进模型犬精神状态、饮食情况的恢复，改善生存质量。(2)显著延长模型犬的生存时间。(3)显著降低模型犬的ALT、TBIL、PT及AMMO值，体现了其降酶、退黄以及促进肝功能恢复的作用，其降酶、退黄、促进凝血功能恢复的效果优于齐墩果酸片；虽然乙肝扶正排毒胶囊组ALT值高于齐墩果酸组(P<0.05)，但是TBIL、PT及AMMO值差异均无显著性意义(P>0.05)，所以只能说明齐墩果酸片降酶效果优于乙肝扶正排毒胶囊，不能说明其总疗效的差异。AST/ALT值的比较结果显示，乙肝扶正排毒胶囊和齐墩果酸片能减轻肝损伤的程度，促进急性肝炎的恢复；乙肝扶正排毒胶囊联合医用三氧能起到保护肝脏、显著降低肝损伤的作用。(4)肝脏组织病理结果显示，未用过任何药物的模型组犬肝细胞坏死严重、坏死范围大，即使生存时间比较长的犬，其肝脏坏死程度也较其它三组犬严重。单独用乙肝扶工F排毒胶囊或齐墩果酸片的犬，其肝组织坏死范围较模型组小。而用乙肝扶正排毒胶囊联合医用三氧预保护犬的肝脏只有肝细胞点状坏死、少量脂肪变性等轻度损伤。 乙肝扶正排毒胶囊联合医用三氧能降低肝损伤实验犬的转氨酶和血氨，减轻黄疸，延长生存时间，具有保护肝脏、减轻肝损伤的作用。
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