摘要
据估计，全世界70％的居民都有乳糖消化不良或乳糖不耐受现象。β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-半乳糖苷酶，E.C.3.2.1.23，俗称乳糖酶)可以将牛奶中的乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。利用乳糖酶来生产这种乳糖水解产品为减轻乳糖消化不良症状提供了一种可行的方法。 本课题从土壤和鲜牛奶中采用X-gal定性试验和ONPG定量试验对酶活性进行测定以筛选高产乳糖酶的菌株。结果有21株在含有X-gal的琼脂培养基上产生蓝色菌落，5株ONPG酶活较高，其中酵母菌Y6号菌株酶活最高。 通过正交试验和单因素试验确定了本实验室乳酸克鲁维酵母菌株产乳糖酶的发酵培养基组分(W/V，％)为乳糖8、葡萄糖0.5、酵母膏0.7、尿素0.15、KH<,2>PO<,4> 1.5、MgSO<,4>。0.1、MnCl<,2> 0.01，pH 6.6～6.8。发酵产酶的最优条件为：培养时间为18～20h，接种量(V/V)为2.5％，装液量为30mL/250mL。平均产酶量可以达到1.930 ONPG U/mL。 采用单因素试验方法研究了乳酸克鲁维酵母乳糖酶的性质，该酶在pH 6.0～8.4范围内比较稳定，酶作用最适pH值在6.4～6.6；最适反应温度为40～45℃，并具有良好的热稳定性；Mn<'2+>，Mg<'2+>，Na<'2+>等对酶有明显的激活作用，而重金属离子如Zn<'2+>，Cu<'2+>等对酶活有抑制作用。实验测定得该酶分别以ONPG和乳糖为底物的米氏常数为3.348mmol/L和16.873mmol/L。 用自制的乳糖酶对牛奶中的乳糖做了水解试验，单因素试验得到：酶用量为10％时，40℃作用5h，乳糖的水解率达到70％以上。
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