摘要
一、半枝莲药材指纹图谱研究 目的：建立中药材半枝莲的HPLC指纹图谱，获得对照图谱，并与不同产地半枝莲药材指纹特征相比较，为科学评价与有效控制半枝莲药材质量提供新方法。 方法：(1)提取：比较了不同提取方法、提取溶剂及提取时间的提取效果，选择提取成分较多，提取率较高的提取条件。(2)色谱条件：选用合适的色谱柱及检测器，调整流动相的组成、配比、流速，调节柱温，选择最佳的色谱条件，使色谱图符合指纹图谱研究的要求。(3)系统适用性试验：在已确定的色谱条件下，考察指纹图谱中参照物野黄芩苷峰的分离度和理论板数。(4)精密度试验：取同一份供试品溶液，重复进样6次，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。(5)重复性试验：取同一批半枝莲药材6份，平行制备供试品溶液，分别进样，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。(6)稳定性试验：取同一份供试品溶液分别于0、2、4、6、8、24、36、48h进样，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。(7)指纹图谱的建立：分别取不同产地的半枝莲药材23批、对照药材1批和混淆品6批样品制备供试品溶液，进行指纹图谱分析。 结论：本文建立了中药材半枝莲的HPLC-UV指纹图谱，并与不同产地的半枝莲药材及其混淆品进行了比较，利用相似度软件对不同产地半枝莲药材间的差异进行了研究，对其质量进行了综合评价，方法重复性和精密度良好，有助于半枝莲药材的标准化种植及质量控制。 二、半枝莲中黄酮类成分的含量测定 目的：建立高效液相色谱法测定半枝莲中6种黄酮类成分的含量，同时测定各样品中总黄酮的含量，为半枝莲药材的质量评价提供有效手段和依据。 方法： 1.六种黄酮类成分同时测定(1)提取：比较不同提取方法、提取溶剂及提取时间的提取效果，选择提取高的提取条件。(2)色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，使各待测成分色谱峰的分离度均符合测定的要求。(3)标准曲线的制备：配制一系列浓度的混合对照品溶液，测定峰面积；以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理得各标准曲线方程。(4)检测限试验：将混合对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为检测限。(5)精密度试验：取同一份样品溶液，重复进样6次，测定峰面积，计算仪器精密度；取同一样品，每日精密称取6份，制备溶液，进样测定，连续测定3日。根据测定结果分别计算日内精密度和日间精密度。(6)稳定性试验：取样品溶液分别于0、2、4．6、8、24h进样测定。(7)回收率试验：取已知含量的药材9份，每份约O．1g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，制备供试品溶液，进样测定高、中、低3种浓度的回收率。(8)样品测定：在上述色谱条件下，测定不同来源半枝莲药材中各待测成分的含量。 2.总黄酮的测定(1)标准曲线的制备：配制一系列浓度的混合对照品溶液，测定吸光度；以野黄芩苷的浓度(mg·mL<'-1>)为横坐标，相应的吸光度值为纵坐标，制备标准曲线。(2)样品测定：依法制备各供试品溶液，测定所有半枝莲药材中总黄酮的含量。 结论：本研究首次建立了高效液相色谱法同时测定半枝莲中六种黄酮类成分的含量。采用波长转换法以各待测组分的最大吸收波长作为相应组分的检测波长，提高了检测灵敏度，方法简便快速、结果准确可靠，专属性强，精密度和稳定性良好，可用于半枝莲中黄酮类成分的质量控制。 三、半枝莲中原儿茶酸的含量测定。 目的：建立高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量，为半枝莲药材的质量评价提供有效手段。 方法：(1)提取：比较不同的提取方法，并对各种影响因素进行考察，选择最佳的提取条件。(2)色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，使原儿茶酸色谱峰的分离符合测定的要求。(3)标准曲线的制备：配制一系列浓度的原儿茶酸对照品溶液，测定峰面积；以原儿茶酸的含量为横坐标，相应的峰面积(×10<'7>)为纵坐标，制备标准曲线。(4)检测限试验：将原儿茶酸对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为检测限。(5)稳定性试验：取样品溶液分别放置0、2、4、6、8、12、24h后进样测定峰面积。(6)精密度试验：取同一份样品溶液，重复进样6次，测定峰面积。(7)重复性试验：．取半枝莲药材平行制备样品溶液6份，测定峰面积，计算各供试品溶液中原儿茶酸含量，求得其RSD。(8)回收率试验：取已知原儿茶酸含量的半枝莲药材，分别加入适量的原儿茶酸对照品，各平行制备同一浓度的样品6份。(9)样品测定：在上述色谱条件下，由标准曲线计算得到各个样品中原儿茶酸的含量。 结论：本文首次建立了高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸含量的方法。该法简便快速、结果准确可靠，专属性强，精密度和稳定性良好，可用于半枝莲中原儿茶酸的质量控制。 一、注射用银杏叶提取物指纹图谱研究 目的：建立注射用银杏叶提取物的HPLC指纹图谱，获得对照图谱，并与不同批次指纹特征相比较，有效控制注射用银杏叶提取物的质量。 方法：(1)色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，选择最佳的色谱条件，使色谱图符合指纹图谱研究的要求。(2)系统适用性试验：在已确定的色谱条件下，考察指纹图谱中参照物芦丁峰的分离度和理论板数。(3)专属性试验：精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液，进样，记录75min内的色谱图。(4)精密度试验：取同一份供试品溶液，重复进样6次，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。(5)重复性试验：取平均装量项下内容物6份，制备供试品溶液，进样，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。(6)稳定性试验：取同一份供试品溶液分别于0、2、4、6、8、24h进样，记录保留时间和峰面积，同时比较所得指纹图谱的相似度。(7)指纹图谱的建立：分别取原料、中间体及注射用银杏叶提取物各10批制备供试品溶液，进行指纹图谱分析。(8)数据分析：运用相似度软件对所得数据进行分析。 结论：本文建立了注射用银杏叶提取物的HPLC-UV指纹图谱，并与不同批次进行了比较，利用相似度软件对不同批次注射用银杏叶提取物药材间的差异进行了研究，方法重复性和精密度良好，有助于注射用银杏叶提取物的质量控制。 二、注射用银杏叶提取物总黄酮醇苷的含量测定 目的：建立高效液相色谱法测定注射用银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量，为注射用银杏叶提取物的质量评价提供有效手段。 方法：(1)色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的配比，使各待测成分色谱峰的分离度均符合测定的要求。(2)系统适用性试验：在已确定的色谱条件下，考察色谱图中各待测物峰的分离度，按槲皮素峰计算理论板数。I(3)专属性试验：精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液，进样，记录45min内的色谱图。(4)标准曲线的制备：配制一系列浓度的混合对照品溶液，测定峰面积；以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理得各标准曲线方程。(5)检测限试验：将混合对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为检测限。(6)精密度试验：取同一份样品溶液，重复进样6次．测定峰面积。(7)重复性试验：取同一批样品6份，制备供试品溶液，进样测定。(8)稳定性试验：取样品溶液分别于0、2、4、6、8、24h进样测定。(9)回收率试验：取已知含量的样品6份，每份约0.22g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，制备供试品溶液，进样测定。(10)样品测定：取原料、中间体及注射用银杏叶提取物各10批分别制备供试品溶液，进样测定，计算含量。 结论：本研究采用高效液相色谱法测定了注射用银杏叶提取物黄酮类成分的含量。方法简便快速、结果准确可靠，专属性强，精密度和稳定性良好，可用于注射用银杏叶提取物中黄酮类成分的质量控制。 三、注射用银杏叶提取物萜类内酯的含量测定 目的：建立高效液相色谱法测定注射用银杏叶提取物中萜类内酯的含量，为注射用银杏叶提取物的质量评价提供有效手段。 方法：(1)选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，使各待测成分色谱峰的分离度均符合测定的要求。(2)系统适用性试验：在己确定的色谱条件下，考察色谱图中各待测物峰的分离度，按白果内酯峰计算理论板数。(3)专属性试验：精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液，进样，记录25min内的色谱图。(4)标准曲线的制备：配制一系列浓度的混合对照品溶液，测定峰面积；以峰面积对数为纵坐标，以浓度对数为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理得各标准曲线方程。(5)检测限试验：将混合对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为检测限。(6)精密度试验：取同一份样品溶液，重复进样6次，测定峰面积。(7)重复性试验：取同一批样品6份，制备供试品溶液，进样测定。(8)稳定性试验：取样品溶液分别于0、2、4、6、8、10、24h进样测定。(9)回收率试验：取已知含量的6份，每份约0.6g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，制备供试品溶液，进样测定。(10)样品测定：取原料、中间体及注射用银杏叶提取物各10批分别制备供试品溶液，进样测定，计算含量。 结论：本研究采用高效液相色谱法测定了注射用银杏叶提取物萜类内酯的含量。方法简便快速、结果准确可靠，专属性强，精密度和稳定性良好，可用于注射用银杏叶提取物中萜类内酯成分的质量控制。
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