摘要
以从新疆特殊环境筛选的具有广谱抗性、协同增效作用的芽孢杆菌组合BCL-8(由Bacillus sp．SL-13、Bacillus sp．SL-14和Bacillus sp．SL-44组成)为研究对象，研究了BCL-8的混菌摇瓶发酵条件，检测了BCL-8的田问防病促生性能，确定了其抗菌物质的理化特性，并对单一菌产生的抗菌物质进行初步的分离，结果如下： 1．通过单因素实验和正交实验，确定BCL-8最佳发酵培养基和发酵工艺。最佳发酵培养基为：玉米粉10g/L、豆粕10g/L、蜂蜜5g/L、碳酸钠2g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁02 g/L、碳酸钙1g/L、硫酸锰0.1g/L、氯化铁0.1g/L、氯化钠0.5g/L、天冬氨酸0.003g/L。最佳摇瓶发酵工艺为：Bacillus sp．SL-13、Bacillus sp．SL-14和Bacillus sp．SL-44的接种比例为2：1：2，培养基初始pH值为7.0，发酵温度30℃，接种量为5％，250ml三角瓶装发酵培养基50ml，摇瓶转速为200r/min。在该条件下发酵72h后BCL-8对立枯丝核菌抑菌效价达833U<,I>；比优化前抑菌效价提高了62％。 2．利用BCL-8的发酵生物制剂对加工番茄立枯丝核病菌进行了温室盆栽、小区和大田防病促生试验。温室盆栽和小区试验结果一致反映出：BCL-8发酵液浸种后可促进加工番茄的营养生长，提高加工番茄对立枯病的防效，分别达58.62％和55.53％，明显高于三株单一菌浸种后的效果。大田试验采用先浸种、出苗后随水滴灌的施用方式，加工番茄的出苗率提高了22％，苗的鲜重、干重和株高与对照相比分别提高了63.8％、61.8％和11.6％，开花数和结果数也分别提高了51％和84％，对立枯病的防效达73％。 3．对BCL-8主要抗菌物质的理化性质研究表明，主要抗菌物质与水合茚三酮反应可显紫色，双缩脲反应表现阳性，证明BCL-8产生的抗菌物质为蛋白类。该抗菌蛋白热稳定性好，在120℃处理30min后抑菌活性仍保留72％；具有较好的耐酸碱性，活性pH范围在4.0-10.0之间；能耐受乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、氯仿等多种有机溶剂，紫外和可见光处理不影响其抑菌活性；蛋白酶K处理对抗菌蛋白的活性几乎没有影响；抗菌蛋白能有效抑制Fusarium oxysporum f. sp．lycopersici、Rhizoctonia solani Kuhn、Phytophthora capsici、Sclerotinia sclerotiorum、Acidovorax avenae subsp．citrulli、Alternaria solani Sorauer等多种病原菌。 4．三株菌Bacillus sp．SL-13、Bacillus sp．SL-14和Bacillus sp．SL-44的无菌发酵液分别通过30％-60％、40％-100％和30％-50％的硫酸铵盐析沉淀获得的各自的抑菌粗蛋白，经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析，Bacillus sp．SL-13得到3个活性峰，Bacillus sp．SL-14得到4个活性峰， Bacillus sp．SL-44得到4个活性峰；Bacillus sp．SL-13、Bacillus sp．SL-14和Bacillus sp．SL-44所得初步纯化的蛋白的浓度分别为0.1mg/ml、0.172mg/ml和0.146mg/ml；蛋白回收率分别为61.3％、63.7％和74.2％。
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