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鹅副粘病毒HN及F基因在昆虫杆状病毒表达系统的表达

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本文对鹅副粘病毒HN及F基因在昆虫杆状病毒表达系统的表达进行了探讨。本研究根据GenBank所发表的HN及F基因的cDNA序列,利用Primer5.0软件,参照昆虫细胞杆状病毒表达系统的质粒图谱,设计引物,以本实验室所保存的pMD18-T-HN及DMD18-T-F阳性质粒为模板扩增出HN及F基因,分别命名为pMD18-T-GPMV-HN及DMD18-T-GPMV-F。将其克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A的Xhol和EcoRl之间的多克隆位点上,分别命名为pBIue-GPMV-HN及pBlue-GPMV-F。纯化该重组质粒并与杆状病毒共转染Sf9昆虫细胞,4d后获得重组病毒,名为P1。将经过3轮蚀斑筛选纯化,PCR鉴定获得重组病毒,分别命名为rBv-HN及rBv-F。将重组病毒反复扩毒3次,获得高浓度的重组病毒名为P3,接种Sf9单层细胞上,4d后收获病变细胞,经SDS-PAGE电泳鉴定,表达F蛋白分子量约为60ku,表达HN蛋白分子量约为66ku,与理论值相符。表达产物HN蛋白的Western blot和Dot-ELISA结果表明其可与鸡抗GPMV血清发生特异性抗原反应,证实所表达的HN蛋白有较好的反应原性。

藏玉婷

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鹅副粘病毒 畜禽免疫 基因表达

硕士

预防兽医学

王君伟

2007

东北农业大学

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S8