摘要
目的：研究自噬/溶酶体途径在6-羟基多巴胺(6-OHDA)致多巴胺能神经细胞死亡中的作用，探讨自噬在帕金森病发病中的机制。 方法：采用脑立体定位黑质致密部给药法，建立6-OHDA介导的帕金森病大鼠模型：采用6-OHDA处理人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型。利用透射电镜和MDC染色法观察DA神经细胞中自噬和溶酶体的激活，免疫荧光法和Westem Blot法检测6-OHDA对DA神经细胞中自噬、溶酶体和凋亡相关蛋白表达的影响，以及抑制自噬和溶酶体对这些蛋白表达的影响。 结果：透射电镜显示，6-OHDA给药后1.5h至24h可见大鼠黑质致密部神经元内溶酶体被激活，自噬小体形成，24h自噬和凋亡同时存在。MDC染色发现6-OHDA能诱导SH-SY5Y细胞产生自噬小泡。免疫荧光法显示模型大鼠与对照组相比，cathepsin I、cathepsin B、Lampl阳性细胞增多，cathepsin L出现核异位表达。3-MA能增加TH阳性细胞数量，显著降低cathepsin L的表达，明显减少NF-kB p65核转位和TUNEL阳性细胞数。在PD细胞模型中，LC3表达量增加，Cathepsin L被激活，在细胞核内大量表达，几乎同一时程，NF-kB p65也大量核转位；自噬抑制剂3-MA、溶酶体碱化试剂NH4C1能增加6-OHDA早期的细胞毒性，减轻晚期的细胞毒性。3-MA、NH<,4>C1和组织蛋白酶抑制剂Leupeptin能减少LC3表达量，Leupeptin能下调cathepsin L的表达。 结论： 6-OHDA．介导的多巴胺能神经细胞死亡与溶酶体的激活及自噬的发生有关。在损伤发生早期，自噬可作为一种保护机制抵御氧化应激对神经细胞造成的损伤，在后期自噬通过激活溶酶体，与NF-kB介导的神经元凋亡通路相关联，共同调控神经细胞死亡。
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