摘要
本研究采用RAPD技术对23个引种的油橄榄品种进行分类和鉴定研究。首先针对油橄榄基因组DNA的提取改良基因组DNA的提取方法，以获得较高质量的油橄榄基因组DNA用于RAPD分析。然后对油橄榄RAPD反应体系体系进行优化，以建立最佳RAPD扩增体系，筛选出适合油橄榄RAPD分析的引物对样品DNA进行PCR扩增。对样品的RAPD图谱进行分析，获得各样品的RAPD分子特征，最后统计和分析数据，同时对样品间的亲缘关系进行分析和讨论。研究结果如下： (1)本研究采用改良CTAB法，分别从新鲜和硅胶保存的油橄榄嫩叶中提取DNA，与其他部位提取效果相比量大，纯度高、褐化程度低；得到的DNA产率达到194-352ng/mg，OD<,260>/OD<,280>为1.82-2.08。通过琼脂糖凝胶电泳分析，DNA完整性较好，达到RAPD试验的要求。 (2)建立了油橄榄RAPD最佳反应体系：PCR扩增的总体积为20μL，包括40ng的模板DNA，10xPCR buffer 2μL，1.5mmol/L MgCl<,2>，0.2mmol/L dNTP，0.25μmol/L引物，Taq酶lU。扩增程序为：94℃预变性2min，94℃变性45s，36℃退火1min，72℃ 2min，40个循环后在72℃延伸4 min，结束后在4℃条件下保存。最后用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。 (3)采用优化后的反应体系对80个引物进行筛选，经过三次重复，筛选出多态性和扩增重复性好、谱带清晰且较多的11个引物，用于油橄榄全部DNA样品的RAPD分析。 (4)应用筛选出11个引物进行扩增，共产生127条带，其中78条为多态性带，占61.4％，平均每个引物扩增的DNA带数为11.55条，多态性DNA的带数为7.09条。扩增出的DNA片段在300-2000 bp之间，其中尤以500-1200 bp之间最多。根据扩增结果建立了品种间亲缘关系的UPGMA聚类图，将23个品种可划分为2大类。 (5)对23个油橄榄品种的分子特征进行了分析，获得了4个品种的RAPD特异标记即阿维金娜在S~oH--600bp、小果卡林在S<,1019>-1400bp和S<,1025>-2400bp、佛奥在S<,1025>-00bp以及科拉蒂娜在S<,1011>-650bp分别有各自的特异带。
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