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苎麻原生质体培养技术研究

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本课题旨在通过研究影响苎麻原生质体培养的主要因素,建立一套原生质体培养直至得到再生植株的高效而完善的体系。主要研究内容和结果如下: 1.原生质体分离与纯化影响因子 苎麻子叶原生质体分离的最适渗透压调节剂(甘露醇)浓度因基因型不同而不同,“5041-3”为11%,“万载铜皮青”、“瑞昌细叶绿”、“广西黑皮蔸”、“印度苎麻”、“1690”等为9%;酶液组合纤维素酶3.0%+果胶酶0.5%酶解9 h和纤维素酶1.0%+半纤维素酶2.0%+离析酶1.0%酶解12 h酶解效果最好。 对苎麻子叶暗处理和生长素预处理结果显示,材料经预处理后,酶解更加充分,原生质体产量提高,原生质体内含物相对减少。暗培养少于24 h产量和活力提高效果不明显,处理36h效果最好,超过72 h原生质体产量和活力急剧下降;生长素处理效果36h最理想。 2.原生质体培养 固液双层培养和海藻酸钠包埋培养效果较液体浅层培养理想,污染率低,更有利于原生质体的细胞壁再生和细胞分裂增殖。 子叶原生质体在附加NAA(0.5 mg/L)、NAA(0.5 mg/L)+BA(1.0 mg/L)、2,4-D(0.5 mg/L)+KT(0.5 mg/L)、2,4-D(0.5 mg/L)+KT(1.0 mg/L)的KM<,8>P培养基中,均发生了二次分裂,但没有进一步的分裂。 3.苎麻体细胞胚胎发生研究 本研究采用苎麻子叶为外植体,获得了类型丰富的愈伤组织,其中浅黄色或黄绿色、颗粒状疏松的愈伤组织有可能产生体细胞胚。实验发现,基因型和材料的生理状况影响体细胞胚胎发生能力;生长素是苎麻组织培养所必需的,且以浓度不超过1 mg/L的2,4-D和CPA为好;细胞分裂素以油菜素内酯效果最好。培养基中附加Gln、Asn、CH,可促进愈伤组织增殖,但是增殖速度过快也不利于体细胞胚胎发生。不同基因型在相同的诱导培养基中愈伤组织形态和分化能力差异很大。WZ愈伤组织增殖最快,最具胚胎发生潜力,而“广西黑皮蔸”愈伤组织增殖量少,速度慢,且易褐化死亡。 4.苎麻器官发生研究 以子叶为材料进行了苎麻器官发生研究实验,得到再生植株。结果表明,TDZ和NAA组合、BA和NAA组合对子叶再生植株起到了极为积极的促进作用,可以保证再生植株频率在60%~80%左右。再生能力以“5041-3”、WZ最强。

张娜

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苎麻 原生质体培养 器官发生 再生植株

硕士

作物栽培与耕作学

彭定祥

2007

华中农业大学

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S5