摘要
真菌聚酮类化合物是一类庞大的次级代谢产物，具有结构和功能的多样性，它包括洛伐他汀、色素和各类真菌毒素等。聚酮合酶(PKS)是介导聚酮化合物合成的关键酶。本论文以橙色红曲菌AS3．4384为出发菌株，从中克隆PKS基因，为后期的功能鉴定及PKS基因全长的克隆奠定基础。具体的研究内容和结果如下： 1.根据已知的真菌PKS基因之序列，设计了2对简并引物(pksF1/R1和pksF1/R2)；以橙色红曲菌AS3.4384基因组DNA为模板，PCR 扩增获得了4条PKS基因片段，分别命名为pksl(Contigl)、pks2(Contig2)、pks3(Contig3)和pks10(Contig10)。经Blast比对发现，pks2与NCBI中已公布的紫色红曲菌PKSl序列(AJ414729，7144bp)完全同源。 2.根据pks1、pks3和pks10的序列，设计了3对特异性的引物(PF1/PR1、PF3/PR3和PF10/PR10)；用3对特异引物从橙色红曲菌AS3．4384 Fosmid文库中进行PCR筛选，获得了3个阳性黏粒；采用超声波破碎阳性黏粒，并将其克隆至pUC18载体中，分别构建了3个2～4Kb的亚克隆文库；以PF1/PR1、PF3/PR3和PF10/PR10为引物，分别从对应的亚克隆文库中筛选阳性克隆子，获得了3条PKS基因，即MApksl、MApks3和MApks10。 3.经生物信息学分析，MApks1为非还原Ⅲ型PKS基因，其编码的蛋白可能参与桔霉素的合成；MApks3和MApks10为还原型PKS基因，其翻译蛋白与负责催化合成T-毒素、洛伐他汀的聚酮合酶均有同源性。
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