摘要
将体外随机化学合成的寡聚核苷酸序列重组到单价噬菌体表达载体,构建了噬菌体随机八肽库,其库容为2×10<'7>cfu,重组率为93%.将11个随机挑选的克隆进行序列的测定,证实其寡核苷酸序列和氨基酸的分布几乎是完全随机的,其多样性可能满足特异性短肽筛选的要求.以固相化的单抗9E10对噬菌体短肽库进行4-5轮的筛选后,任选多个所获克隆进行ELISA检测.结果发现第4轮后阳性率为22%,第5轮后则为100%.且此结合反应可被9E10单抗所针对的c-myc十肽具有同源序列ISExxL,而另一种克隆的序列则与之完全不同.为了分析该两种克隆的免疫学特性,将单价噬菌体短肽表达载体中gⅢ片段切除,在大肠杆菌中表达可溶性短肽分子,ELISA竞争抑制实验证实,可溶性短肽可竞争抑制表E10单抗与c-myc十肽的结合.进一步将噬菌体短肽的单价表达载体改建为多价表达载体,制备多价表达的噬菌体短肽分别免疫兔和小鼠,ELISA实验和ELISA竞争抑制实验结果证实,两种克隆的免疫抗血清均可与c-myc十肽结合,表明这二个克隆尽管在序列上与原自然抗原不同,但在结构上真正模拟了c-myc十肽的抗原表位,它们在体内可诱发相似的免疫反应.
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