摘要
该论文包括两部分工作:第一部分是将HED-2进行原核细胞中的表达,采用现有的HED-2 1926bp片段以及用PCR的方法获得的不含3'非编码区的1500bp的两个片段分别与pET30a(+)、pQE30及pGEX-4T-3等三种高效表达载体重组,其中pET30a(+)-HED2-1500及pGEX-4T-3-HED2-1500在大肠杆菌中得到了表达,表达蛋白的分子量分别约为57KD和40KD,前者与理论值相符,同时DNA序列分析也验证了重组基因片段的阅读框架及核苷酸序列的正确性,而后者则与理论值80KD差距较大;另外为了提高蛋白表达量,还探索了不同表达条件对蛋白表达的影响.为进一步研究HED-2编码蛋白的功能打下了基础.第二部分工作为寻找HED-2的5'端序列:一方面以人睾丸组织mRNA及总RNA为模板,按照我们现有的序列设计合成3'引物,参照有关文献设计合成5'引物,试图用反转录-PCR的方法以期获取其全长cDNA序列;另一方面又用上述引物用PCR的方法分别对人睾λgt10、λgt11、λZAPⅡ cDNA文库进行PCR扩增.结果反转录-PCR产物长度约为1.1kb,而筛库所得最长片段也约为1.1kb,与预期的约2.2kb不相符.HED-2全长序列的获得有待于进一步的努力.
NETL