摘要
该文较全面地研究了基因工程人白介素-6(rhIL-6)变性复性的工艺条件.通过对变性剂浓度、pH、蛋白浓度、变性复性时间等因素的研究,确定变性条件为:在50mmol/L的Gly-NaOH体系中(pH10.0),25mmol/Lβ-ME,8mol/L脲,包涵体浓度为10ml/ml,于37℃水浴变性4h;复性的工艺条件为:用相同的缓冲液10倍稀释,用HAc调pH为7.0,于室温下复性14h左右,可获得较高的恬性,约为10<'6>U/mg.该文进一步讨论了复性工艺的改进方案,比较了梯度稀释复性和在复性液中分别加入 Cu<'2+>、PEG、谷胱甘肽、伴侣蛋白时的复性效果.结果表明Cu<'2+>和谷胱甘肽对于rhIL-6是较好的复性促进剂, 活性可达10<'7>U/mg.该文采用了多种实验方法来研究rhIL-6的复性规律.除用SDS-PAGE、测蛋白浓度等常用手段以外,还将细胞测活、HPLC以及DTNB等方法结合运用,并改进了细胞测活法,得到了精确的结果,取得了一定的进展.
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