摘要
疟疾是世界上分布和流行最广的寄生虫性疾病之一.由于疟原虫生活史复杂,至今尚未研制出有效的疫苗来防治这种疾病.利用PCR技术,以pMC05-AWTE质粒为模板扩增出AWTE基因,并进行了序列分析;将AWTE基因克隆至温度诱导型表达载体pBV220(表达非融合型AWTE蛋白)和pES31b(表达融合型AWTE蛋白-MS<,2>-AWTE)及IPTG诱导型表达载体pKEN1(表达非融合型AWTE蛋白)和pGEMEX1(表达融合型AWTE蛋白-T<,7gene 10->AWTE),再转入不同的大肠杆菌进行表达.结果只有AWTE基因与MS<,2>或T<,7 gene 10>融合后可以在大肠杆菌中有表达,而非融合型AWTE基因均无表达;将所表达的融合型AWTE蛋白MS<,2>-AWTE和T<,7gene10>-AWTE初步纯化后,ELISA检测证实表达产物具有免疫学活性.结论:(1)原核质粒pEX31b-AWTE和pGEMEX1-AWTE表达融合蛋白MS<,2>-AWTE和T<,7gene10>-AWTE可以作为CTB/AWTE疫苗的阴性对照以评价CTB/AWTE疫苗中CTB佐剂的效应,也可用作测定AWTE抗体的合适抗原;(2)在P<,R>P<,L>或lac启动子调控下的AWTE基因以非融合蛋白形式表达时,在SDS-PAGE电泳检测中都无可见的表达事;(3)融合表达AWTE蛋白是寻求提高AWTE基因在原核表达系统中表达效率的有效途径.
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