摘要
目的:该文对省医药生物中心构建的Sak变异基因(G34,G36,R43,D45)分泌型表达工程菌的表达情况及产物蛋白的纯化方法、生物活性和理化性质等进行了系列研究.结论:此分泌型表达Sak工程菌可高效表达Sak蛋白,表达率居国内外领先水平.Sak蛋白主要表达于周质窨,采用冷冻低渗裂解法裂解菌体使纯化步骤简化.裂解上清经SP-Sepharose离子交换柱和S-200分子筛层析柱两步法纯化后,Sak蛋白得到了理想的蛋白纯度并保持了完整的结构.其活性高于国内同类产品,接近国际同类产品水平,纯化蛋白的分子量、等电点、紫外光谱特征及NH<,2>-末端氨基酸序列等理化性质均与文献报道基本一致.该研究系统探讨了分泌型高效表达Sak工程菌的表达特征,摸索出一套简便的纯化方法,并对纯化产品进行了多方鉴定,均取得了较为满意的结果,为日后大规模的生产和临床应用奠定了基础.
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