摘要
该研究首先从人类基因组BAC文库中筛选含人β-珠蛋白基因簇的BAC四个克隆.在限制性内酶酶谱、末段直接测序、染色体原位荧光杂交(FISH)等分析的基础上,选出最适合进行基因表在调控研究的克隆BAC186D7.大量提取并纯化BAC DNA后,用NotⅠ酶切分离出含完整人β-珠蛋白基因簇的插入片段,利用Sepharose CL-4B柱经凝胶过滤层析快速分离插入DNA片段和载体DNA,选择合适浓度的DNA经显微注射制作转基因小鼠,并成功地建立了相关的转基因动物.获得了几个独立的包括完整基因座位的转基因鼠株系.结论:1)从人类基因组BAC文库中筛选到含完整人β-珠蛋白基因簇的克隆BAC186D7.2)通过大量制备和Sepharose CL-4B柱凝胶过滤层析分离和纯化β-BAC DNA,成功得到了对细胞无毒性、完整的、不含载体序列的β-BAC DNA.3)建立了适当的BAC介导的β-珠蛋白基因簇的转基因鼠系统.4)利用温度敏感型的穿梭载体(shuttle vector)经同源重组获得删除了LCR中HS3的核心序列的BAC重组体.5)HS3核心序列的缺失不影响β类珠蛋白基因的发育表达模式,但对基因表达水平,尤其是发育成型的基因表达有较明显的作用,而且会使基因表达丧失位点不依赖性.
NETL