摘要
血管内皮细胞生长因子VEGF及其受体在血管生成过程中起到了重要的作用.VEGF受体1(Flt1)作为其酪氨酸激酶受体,介导了血管形成过程中内皮细胞的游走、组织因子的产生、滋养层细胞NO的释放、以及VEGF刺激的单核细胞和巨噬细胞的游走.它的酪氨酸激酶区直接参与了VEGF与Flt1结合后的胞内信号传导途径.现在对该激酶在原核细胞中的表达及其功能研究尚未有报道.该文报导了Flt1受体酪氨酸激酶区(Flt1-TK)的原核表达体系的建立,以及地其体外功能特征的研究,并以此为基础建立了Flt1-TK抑制剂的高通量筛选分子模型.基于这一模型,并结合该中心优势,我们通过高通量筛选找到了两个抑制率较高的Flt1受体酪氨酸激酶的抑制剂.这两个抑制剂在细胞模型上也被证明是有效的,同时它们的结构稳定,是有前途的抑制肿瘤血管生成的先导化合物.利用该中心的优势,共筛选了3600个化合物,并对阳性化合物进行复筛,结果得到8个Flt1酪氨酸激酶抑制剂.结合利用化合物结构母核搜索整个化合物库的方法,最终得到了两个较好的Flt1酪氨酸激酶的抑制剂A1和A5,它们的IC<,50>分别为9μM和3μM.这两个化合物均能显著抑制GST-F对底物的磷酸化;但A1对GST-F的自磷酸化无明显影响,而A5则对该过程有显著抑制.值得注意的是A1和A5都能在Flt1酪氨酸激酶受体的细胞模型上起作用.这说明抑制剂A1和A5都能顺利的通过细胞膜,从而起到抑制VEGF/Flt1信号传导途径的作用.另外,这两个化合物的分子结构稳定,易于进一步改造,因而是理想的抗肿瘤血管生成抑制剂的先导化合物.
NETL