摘要
聚-β-羟基链烷酸(PHA)是许多微生物作为碳源、能源的一类贮藏性聚酯,具有广泛应用价值.前期工作已通过聚合酶链式反应扩增并克隆了罗氏真养菌(Ralstonia eutrophus)中PHB合成三个关键酶基因——phbA(编码3-酮硫裂解酶)、phbB(编码乙酰乙酰CoA还原酶)、phbC(编码PHB合酶),并分离种子特异性启动子(7S promoter)和质体导肽序列(ctp),利用已克隆的三个基因,分别构建含种子特异性启动子的嵌合phbC、phbB的二价表达载体pSCB及嵌合phbC、phbA、phbB的三价表达载体pSCAB,并由导肽将基因产物定位质体.经根癌农杆菌介导转化油菜(Brassica napus L.)H165,分子检测表明,已获分别整合三个基因且在转录水平表达的转基因植株.结果分析表明,nap300可启动外源基因的种子特异性表达.研究人员将扩增到的片段分别与gus和phbA基因相连,构建鉴定其功能的表达框架.经冻融法转化农杆菌LBA4404,并通过叶盘法分别对烟草(Nicotiana tabacum cv. Wisconsin38)进行转化,PCR和PCR-Southern结果表明我们已获转基因植株,取其种子做GUS和3-酮硫裂解酶活性分析.利用已有的三种种子特异性表达载体继续油菜三系转化工作,已获分别整合相应基因的转基因油菜植株,为田间杂交工作提供更多的试材,为早日实现PHB商品化生产提供理论依据.
NETL