摘要
该研究以柑桔、苹果、草莓、梨和猕猴桃5种有代表性的果树为试验材料,对离体保存方法及其遗传变异进行了研究,主要研究结果如下:1.建立了5个基因型的柑桔单细胞姊妹系以及苹果和草莓各2个基因型的单芽姊妹系,为遗传变异研究提供了试验材料.2.建立了根据细胞大小计算有丝分裂指数以及判断细胞倍性的方法,利用该方法在活体状态下对柑桔胚性愈伤组织中不同倍性细胞群体的有丝分裂指数以及判断细胞倍性的方法,利用该方法在活体状态下对柑桔胚性愈伤组织中不同倍性细胞群体的有丝分裂指数进行计算,表明四倍体变异细胞在常规培养条件下的有丝分裂受到抑制,并通过程度性细胞死亡被淘汰.3.完善或改进了5种果树组培材料的离体保存方法.4.柑桔胚性愈伤组织的染色体观察表明,染色体变异普遍存在并在愈伤组织形成早期就已发生,异常有丝分裂是造成染色体变异的细胞遗传学机制;继代培养和离体保存1年后愈伤组织的倍性组成保持了相对稳定性,这是由于多倍体变异细胞在不断产生的同时也通过程序性细胞死亡途径不断被淘汰.5.用RAPD分子标记对继代培养和离体保存1年后的遗传变异进行了检测,继代培养前后的8个纽荷尔脐橙单细胞姊妹系用102个随机引物共扩增出9796条带,除引物OPH-15检测到4条变异带外,其余相同,变异率约为0.04%;上述细胞系和引物也用于超低温保存后的变异检测,共扩增出9792条带,保存前后未发现变异;缓慢生长法保存的8个红马叙葡萄柚单细胞姊妹系用98个随机引物共扩增出8624条带,也没有检测到变异.6.用AFLP分子标记对离体保存后的遗传变异进行了检测.7.对柑桔转化愈伤组织、梨和猕猴桃转化组培苗(或茎尖)成功地进行了离体保存,通过GUS基因的化学染色、PCR扩增、SSCP标记和Southern杂交验证了GUS基因在离体保存过程中的稳定存在和表达.8.利用MSAP标记对各种材料的DNA甲基化状况进行研究.
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