摘要
通过研究预处理对发酵液中水蛭素稳定性的影响及不同层析方法对脱色、分离的效果,提出了生产高纯度水蛭素的初步纯化工艺,并通过优化,建立了能获得同样高纯度和较高活性回收率的简化工艺.发酵上清在100℃下作用10～20min,水蛭素活性没有损失,比活性提高了5%.阳离子交换层析与凝胶过滤或与反相层析的组合可有效应用于发酵上清液的脱色和目的蛋白的粗分离.阳离子交换层析、凝胶过滤、阴离子交换层析和反相层析的初步纯化工艺能得到纯度大于99%的目的蛋白,目的蛋白的活性回收率为67%.由阳离子交换层析和反相层析的简化优化工艺能得到同样高纯度的水蛭素和三种高纯度目的蛋白降解物,目的蛋白的活性回收率提高到74%.通过电泳、RP-HPLC及质谱等鉴定方法,证实分离纯化得到的蛋白为目的蛋白水蛭素.
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