就单细胞PCR植入前诊断而言,由于检材有限,因此在扩增效率与准确性方面有很高的要求.目前,运用这一技术主要面临两个问题:污染和无扩增. 为了进行植入前诊断的应用,该文围绕上述两个方面,从以下两部分进行了研究和探索. 第一部分:无污染、高效单细胞PCR体系的建立在建立无污染PCR工作体系的基础上,吸取人单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球,采用碱裂解、蛋白酶K裂解和改良的蛋白酶K裂解三种不同细胞裂解方法进行细胞裂解,随后以Hotstar酶结合巢式PCR扩增人肾上腺脑白质营养不良(Adrenoleukodystrophy,ALD)基因的3号外显子全编码区,通过观察其有效扩增率来比较不同裂解体系的细胞裂解效率.第二部分:单细胞PCR在单基因病植入前诊断研究中的应用:在建立了高效单细胞PCR体系的基础上,我们以人单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球为研究对象,选取了几种该实验室已经建立了基因诊断方法、发病率较高、较为典型的几种单基因病进行研究.上述研究结果表明,以碱裂解为基础的单细胞PCR体系稳定可靠,适合于推广运用.
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