摘要
目的:获取具有生物学活性的重组人CTLA4胞外区蛋白(CTLA4e),探讨其在变应性疾病和器官移植排斥反应防治中的作用和机理. 方法:1.重组人CTLA4胞外区蛋白在酵母GS115中的表达和纯化:首先通过基因操作技术,从pCTLA4/Ig质粒中扩增400bp的CTLA4胞外区片段;将CTLA4胞外区片段插入pPIC9质粒中获取单拷贝酵母表达质粒pPIC9-CTLA4<,125>并进一步构建多拷贝酵母表达质粒pPIC9K-CTLA4<,125>.利用限制性内切酶分析、DNA序列测定在DNA水平对质粒进行鉴定.将pPIC9K-CTLA4<,125>质粒电转化GS115酵母;通过筛选获取稳定表达CTLA4胞外区蛋白的表达菌.表达菌甲醇诱导发酵;发酵上清液经超滤、硫酸胺粗分级分离以及阴离子交换层析,纯化出CTLA4胞外区蛋白.利用Dot-ELISA、SDA-PAGE、Western-blot等方法在蛋白水平对CTLA4胞外区蛋白的表达进行了鉴定.结论:通过GS115酵母表达并纯化可获取具有生物学活性的重组人CTLA4胞外区蛋白.该蛋白可抑制T细胞活化、增殖,并可缓解一些因T细胞活化所介导的免疫相关疾病如器官移植后排斥反应、变应性鼻炎.该实验中短期运用CTLA4胞外区蛋白便具有良好的防治变应性鼻炎和移植排斥反应的效果,结合以往该实验室工作的资料和文献报道,提示CTLA4胞外区蛋白在体生物学活性的发挥是基于其诱导针对特异性抗原的特异性免疫耐受.但CTLA4胞外区蛋白并未能诱导移植物的长期存活,这提示CTLA4胞外区蛋白诱导免疫耐受的程度浅,要成功诱导长期或终生免疫耐受尚需进一步的探索.
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