摘要
该研究的主要内容包括:利用已获得的转非翻译PVY CP(pPVYCPM)不同抗性的烟草,研究外源基因的整合方式与RNA介导病毒抗性的关系;通过不同抗性材料的嫁接试验,对RNA介导抗性的传导规律以及马铃薯Y病毒(PVY)的传播移动规律加以研究.具体结果如下:1.在转pPVYCPM基因烟草Southern blot分析时发现,同一转基因植株的基因组DNA用不同酶切时所得到的拷贝数不同,如用HindⅢ酶切时M4-1,M74-1,M84-1,M18-1的拷贝数分别为7,6,5,4;而用EcoRI酶切拷贝数分别为2,4,4,5.2.对转pPVYCPM基因的不同抗性转基因株系T<,1>代的研究表明,转基因的拷贝数与植株的抗病性有一定的联系.3.从已获得的转非翻译PVY CP基因烟草中选取高度抗病和感病株系各4份,对其T<,1>代植株分别进行卡那霉素抗性鉴定、PCR检测和PVY<'N>抗病性鉴定.4.高度抗病株系M13 T<,0>、T<,1>代卡那霉素抗性鉴定、抗病性鉴定和Southen blot分析表明,T<,1>代与T<,0>代相比,卡那霉素抗性和抗病性分离较小,分别为2.1%和6.2%.T<,1>代杂交带型和拷贝数有较大分离,但多数仍为多拷贝,表现高度抗病.5.单嫁接实验表明,PVY CP介导的抗病性并不能从高度抗病砧木传到上部转基因感病接穗或未转基因的接穗.6.双嫁接试验证明,PVY<'N>病毒可以跨越一段较长的(可达42cm)高度抗病植株的茎传递到未转基因的接穗中并引起症状,中部高度抗病植株不产生症状,ELISA检测为阴性.7.利用农杆菌渗入法对若干转pPVYCPM的感病株系的研究表明,瞬时表达并不能启动RNA介导的抗性机制,对抗性起决定作用的可能还是植物体内的转基因.
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