摘要
作者采用基因克隆技术,将来自一临床分离Hp MEL-HP27的fla(flaA1533bp、flab1545 bp)基因全长进行PCR扩增,并与克隆载体pNEb193进行连接,制备重组质粒,然后导入大肠杆菌TB1中,用蓝白实验初步筛选可疑阳性克隆.可疑阳性克隆进一步进行特异PCR和酶切鉴定后对插入片断进行测序,并将测定的序列与已知序列进行同源性比较.由于flaA编码主要的鞭毛蛋白,所以将测序鉴定后的flaA基因插入表达载体pMAL -C2x,所得的重组表达载体转化大肠杆菌TB1,筛选阳性克隆经PCR、酶切鉴定后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其编码的蛋白表达,用SDS-PAGE、Western-blot的方法鉴定表达产物及其免疫反应性.1.首次将Hp河南分离株MEL-HP27的flaA基因、flaB基因成功地克隆并测序.2.测序结果从基因水平上证明了flaA基因、flaB基因确实是一个比较保守的基因,支持了鞭毛基因可以作为Hp疫苗的候选成分之一.3.首次成功地构建pMAL-C2x-flaA重组表达载体,SDS-PAGE表明重组表达载体的高效性,融和蛋白的表达量可达28.5%.4.低温诱导可以减少不溶性包涵体的形成.5.Western blot检测表明FlaA融合蛋白(MFA)具有良好的免疫反应性,为Hp疫苗的研制奠定了基础.
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