摘要
由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染所引起的艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS)对人类健康构成了严重的威胁,研制安全有效的艾滋病疫苗是控制艾滋病流行的根本途径.该研究的目的是利用毕赤酵(Pichia pastoris)表达系统高效表达并纯化HIV-1中国株CN54的Gag抗原,并在不同的免疫策略中评价其作为蛋白疫苗的免疫原性.该论文首先对毕赤酵母高拷贝整合型表达载体P819进行改造,通过定点突变,使aoxl启动子下游的AsuII成为单酶切位点,得到新载体pPS1.0,电转化毕赤酵母菌株GS115,G418加压筛选高拷贝重组子,甲醇诱导表达,获得高表达工程菌株.接种5L发酵罐,优化发酵参数,菌体密度OD<,600>超过300,Gag表达量达到120mg/L.经过SP Sephaarose FF和DEAE Separose FF离子交换柱层析纯化,抗原蛋白纯度达到95%.P24抗原检测实验和Westernblot实验表明,毕赤酵母表达的Gag蛋白进行纯化,获得了用于检测疫苗免疫反应的抗原蛋白.
NETL