摘要
分析引起甜菜当年抽苔的原因,国内外研究认为遗传与环境因素都能影响甜菜抽苔.可分为内因和外因.具体地说,内因是由控制甜菜一年或二年生习性的基因决定的,而外因则是生态条件即当年能满足其生殖生长的环境条件,那么就会出现当年抽苔的现象,该条件主要是春化和光周期:即低温和长日照.此外营养条件、激素水平等也影响甜菜当年抽苔.无论是光周期、赤霉素还是低温这些环境条件都是外因,都要通过内因,也就是必须通过对基因的作用才能起作用.因此,要想研究二年生甜菜当年抽苔的机理,就必须分离克隆抽苔基因,弄清基因结构,表达调控等,这样才能从分子水平解释抽苔机理.该试验研究低温诱导甜菜抽苔的差异表达基因,探讨二年生甜菜当年抽苔的分子机理.主要研究结果如下:1.试验在Conviron E15型人工气候室人工控制温度、日长进行.采用马凤鸣等试验条件(长日照16h、4 ℃、72d,抽苔率100%)诱导"甜研材料"幼苗抽苔;采集不同时期和各处理的茎尖,提取总RNA,置换合成双链cDNA.合成3对接头引物,用代表性差示分析分离抽苔差异表达基因片段.将分离到的差异片段克隆,测序,获得323bp差异片段DP3序列.GenBank中的注册号为AY326073.2.根据cDNA-RDA获得323bp差异片段DP3序列,设计引物.3.根据RACE双拼接结果设计一对引物,以Ty7的cDNA为模极,进行PCR扩增,扩增回收的片段命名为Ty7Br600.将其克隆,测序,获得609bp差异片段序列.4.分别以Ty7和TA33的DNA为模板,进行PCR扩增,扩增回收的片段分别命名为Ty7Br900和TA33Br600.将其克隆,测序,分别获得609bp和855bp基因片段序列.5.综合DNAMAN、PHD、SOSUI软件、GLOBE等几种软件预测结果,可以推测Ty7Br600基因编码部分的蛋白可能是一种分子量约为15KD,等电点pI为5.85,具有紧凑的球状膜蛋白(compact,globular membrane protein).6.对Ty7Br600基因进行RT-PCR分析,7.构建原核表达载体,转化JM109菌株,IPTG诱导蛋白表达,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.
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