摘要
前体mRNA剪接在真核细胞基因表达产物多样性、基因表达的时空差异性方面具有重要作用.SR(Serine-Arginine rich)蛋白是具有帮助识别正确剪接位点并促进剪接体成熟功能的一类重要剪接因子.Dxl6是果蝇SR蛋白家族的新成员.已有RNA原位杂交的研究提示,Dxl6是果蝇胚胎发育过程中中枢神经系统特异性表达的基因.为了能够深入研究Dxl6蛋白的功能,了解其在果蝇胚胎及胚胎后发育,尤其是中枢神经系统发育中的作用,通过基因工程的亚克隆技术,在体外融合表达纯化Dxl6两段截短蛋白,免疫动物后制备并分别纯化抗Dxl6蛋白RS结构域和抗Dxl6蛋白中间部分的两种多克隆抗体,经免疫印迹法鉴定结果显示,用两种抗体在原核表达体系中分别检测目的蛋白时均出现特异性的显色带,而只有抗Dxl6蛋白RS结构域的抗体能特异识别果蝇组织中的Dxl6蛋白.利用抗Dxl6蛋白RS结构域的抗体通过果蝇胚胎的免疫染色技术,分别检测了Dxl6蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎中的分布型及其亚细胞定位,进而在P因子插入突变体果蝇k00213、Nop5<'k00230>/Cyo和Doa<'01705b>/TM3三种品系的胚胎中检测Dxl6蛋白的表达情况并作统计分析.结果显示,Dxl6蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎发育的早期分布广泛,后期逐渐集中于中枢神经系统;而且早期主要集中于细胞核内,后期在细胞核与细胞质中均有分布;在三种突变体果蝇胚胎中都有约1/4胚胎未检测到Dxl6蛋白的表达,而其余胚胎中该蛋白的表达分布与野生型一致.该研究为Dxl6蛋白研究的后续工作制备了有利的工具,通过在果蝇模型中的检测说明Dxl6蛋白是果蝇胚胎中枢神经系统发育过程中特异的前体mRNA剪接因子;Dxl6蛋白极有可能也是一种穿梭蛋白;k00213与k00230两种P因子插入均直接影响了Dxl6的表达;Doa<'01705b>/TM3品系中P因子的插入间接影响了Dxl6的表达,进而提示Dxl6可能是一种自剪接蛋白.
NETL