该文利用发根农杆菌A4,R1601菌株和ATCCl5834菌株侵染高山红景天,通过对外植体的选择、外植体最适生长条件的优化、农杆菌侵染条件的优化、除菌条件的优化、毛状根生长条件的优化,建立了高山红景天的毛状根培养系统.研究表明,农杆菌A4;R1601;ATCCl5834侵染高山红景天能产生毛状根,其中,ATCCl5834和A4菌株侵染率高;外植体以叶片最好,发根农杆菌菌液浓度在OD<,600>=0.4~0.5;乙酰丁香酮浓度为50μmol/L;侵染时间为25分钟;共培养时间为2天;共培养的培养基的pH值为5.0;抑菌培养基添加"羧苄青霉素150 mg/l+头孢霉素100mg/l"的培养条件最佳.PCR检测结果表明:所获得的高山红景天毛状根在500bp处有与rolC基因相同大小条带存在.PCR-Southern分子杂交检测进一步证明了该条带是rolC基因,高山红景天基因组中整合了来源于Ri质粒的T-DNA基因.转化的毛状根在不添加外源激素的培养基上自主地快速生长并表现出了典型的毛状根特征.研究表明:在1/2 MS<,0>液体培养基、散射光、温度为20℃左右、pH4.5~4.8等条件下,毛状根生长迅速.
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