摘要
该文对重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原(HBsAg)进行了研究.开发了一种具有选择性压力的合成培养基,取代了常用的YNB培养基.单纯使用合成培养基进行培养,发现在发酵后期抗原的表达量有所下降,该现象是由营养缺乏所引起的.在此合成培养基的基础上发现(NH4)SO4和乙酸对抗原的表达有抑制作用,而麦角固醇对抗原的表达有促进作用.恒速流加葡萄糖可以提高菌体密度,但在总糖浓度相同的情况下,恒速流加葡萄糖时抗原表达量比分批发酵要低.蛋白胨的补加能够有效地维持抗原的表达,与恒溶解氧补料方式相比,恒速流加大豆蛋白胨是更加合理的补加方式.结合合成培养基和蛋白胨的补加,建立了两阶段发酵法利用重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原,使最终的总抗原表达量比优化前提高了25%,单位菌体抗原表达量比优化前提高了68%.通过对合成培养基进行优化,降低了生产成本,使两阶段发酵法能被用于实际生产.
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