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内源性BDNF促周围神经损伤后再生及其机制的研究

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目的在小鼠坐骨神经损伤后给予BDNF抗体中和内源性BDNF,然后观察再生情况以此反证内源性BDNF对再生的影响.方法39只小鼠在右侧坐骨神经压榨损伤后随机分成三组(每组13只).实验组:腹腔注射BDNF抗体;实验对照组1(NGS组):腹腔注射等量正常山羊血清;实验对照组2(NS组):腹腔注射等量生理盐水,每周二次,每组5只动物坐骨神经损伤7天时进行挤压试验(Pinch test),其余每组8只动物存活14天,处死前4天在小鼠右侧后肢后群肌与足底皮下分别注射荧光示踪剂快兰(Fast Blue).动物灌注固定后,取坐骨神经压榨损伤点远侧端5mm长神经作半薄及超薄切片观察;取与坐骨神经相连的脊髓与背根节,作冰冻切片在荧光显微镜下观察荧光标记细胞.目的探讨小鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF是否参与了脊髓前角运动细胞内GAP-43、突触素Ⅰ和突触囊泡素表达的调节.方法小鼠坐骨神经压榨损伤后,腹腔注射BDNF抗体,(腹腔注射NS做为对照),动物存活1-2周.用RT-PCR和组织原位杂交技术观察GAP-43与突触素Ⅰ mRNA在脊髓腰骶膨大部前角的表达,用Western blot与免疫组织化学方法观察GAP-43与突触囊泡素(SYN)蛋白在脊髓腰骶膨大部前角运动神经元内的表达.目的探讨BDNF对体外培养的大鼠脊髓前角神经元内突触素Ⅰ与突触囊泡素(SYN)表达的影响.方法取孕14d大鼠子宫内胎鼠的脊髓腹侧部分神经元,体外有血清培养.在培养7d后,随机分成对照组、BDNF组和抗BDNF组. BDNF组培养液中加入BDNF(20ng/ml),抗BDNF组培养液中加入BDNF抗体(20 μ g/ml),对照组加入等量Hank's液.三天后在倒置显微镜下计数每视野三组神经元存活数,并用NF-200、MAP-2、NSE的免疫组化反应对神经细胞鉴定.行突触素Ⅰ与SYN免疫组化反应,对部分细胞行突触素Ⅰ mRNA原位杂交反应,运用图像分析系统对突触素Ⅰ与SYN免疫组织反应阳性产物以及突触素Ⅰ原位杂交反应阳性产物作光密度分析.

李昌琪

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脑源性神经营养因子(BDNF) 再生 坐骨神经 电镜荧光示踪 脑源性神经营养因子 生长相关蛋白 突触素Ⅰ 突触囊泡素 脊髓神经元 体外培养

博士

精神病学与精神卫生学

杨德森、罗学港

2004

中南大学

中文

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