摘要
该文以苹果三倍体品种"乔纳金"试管苗叶片为试材,研究其最优胚状体发生体系建立的方法,测定胚状体发生过程中的多胺变化,并对形态学和组织学作了分析,结果如下:将乔纳金试管苗叶片接种在MS+BA 2.0 mg·L<'-1>+IAA 6.0 mg·L<'-1>+2,4-D 0.3 mg·L<'-1>培养基上预诱导6d,获得胚性细胞,然后转入MS+BA 2.0 mg·L<'-1>培养基上诱导胚状体发生,最高诱导率可达96.1%.激素配比及浓度是诱导胚状体发生的关键.除激素配比外,影响乔纳金最优胚状体发生体系建立的因素还有很多.其它影响因素的最佳组合为:取继代培养30天的试管苗前三片叶,横切三刀,近轴面向上平铺在培养基上,蔗糖浓度为30 mg·L<'-1>,暗培养30天.在附加有2.0 mg·L<'-1>BA、6.0 mg·L<'-1> IAA和0.3 mg·L<'-1>2,4-D的MS培养基上,创伤叶片经过6d胚性细胞诱导后,大部分叶片基本形态无明显变化,个别叶片形态发生扭曲,但伤口处无愈伤组织发生,伤口细胞呈淡褐色,伤口附近细胞呈淡黄色.胚状体诱导培养30d后,大部分已经发育成熟.此时,宜将培养物转移至MS+BA0.5 mg·L<'-1>+IAA0.1 mg·L<'-1>的培养基,光照条件下进行壮苗培养.20d后,将壮苗培养生长至2cm左右的无根苗转至MS+IBA 0.8mg·L<'-1>+IAA 0.7 mg·L<'-1>的培养基中诱导生根,生根率可达90%以上.一个月后长成健壮的完整植株,炼苗后即可出瓶移栽.得到再生苗后,对22株再生植株进行染色体倍性鉴定,表明再生植株均为三倍体(3x=51),没有染色体数目变化.大量接种外植体后,按胚状体发生的不同时期取材,测定胚状体发生过程中的多胺含量变化.胚状体发生过程中,多胺含量是先升后降.刚接种的叶片中多胺含量较低,随胚状体的诱导发生,含量逐渐升高,至心型胚期达到高峰.在胚状体的成熟过程中,又开始逐渐下降.
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