摘要
该研究小组对斑马鱼的肾髓(kidney-marrow)cDNA文库进行EST测序,初步筛选了斑马鱼胰腺组织内特异表达的基因,作为侯选基因来进一步研究它们在斑马鱼胰腺发育中的作用及在诱变建立的斑马鱼人类疾病模型上用于对受累基因的定位克隆.在此基础上,我们应用全胚胎原位杂交方法研究胰岛素基因及克隆号为RK067A4H04,RK108A4B09,RK109A2A03,RK110A4E11基因在斑马鱼全胚胎的表达状况,证实以上基因均在胚胎斑马鱼胰腺组织特异表达,并进一步验证其在成年斑马鱼的表达状况,结果表明RK110A4E11和胰岛素基因在斑马鱼胰岛细胞内特异表达.利用RT-PCR技术从斑马鱼组织中克隆到甲状腺球蛋白(TG)的cDNA序列,应用全胚胎原位杂交证实TG基因在胚胎斑马鱼甲状腺组织特异表达.为进一步研究其在成年斑马鱼的表达状况,构建TG核心蛋白的融合蛋白表达载体pGEX-TG,用SDS-PAGE方法将初步纯化的蛋白进一步分离,获得特异性的蛋白条带,免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体,并经Western Blot方法检测所获得的多克隆抗体的免疫学特异性和效价,进而利用免疫组化技术研究TG在成年斑马鱼甲状腺组织的表达,结果表明其在甲状腺组织中有特异表达.
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