表达HIV-1多价合成基因的痘苗病毒载体构建及疫苗株筛选

扫码查看

原文链接

NETL

中文摘要：由人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染而引发的人获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS,艾滋病)不仅严重影响人类的健康,还给各国的经济带来了沉重的负担.虽然现有的干预措施和抗病毒药物的联合疗法使控制和治疗艾滋病取得很大进展,但并没有阻断HIV的传播,并出现了一些新的问题.为有效控制HIV的传播,需尽快研制出安全、有效的HIV疫苗.HIV基因组变异较大,使HIV在流行过程中出现不同的亚型.但在一定的时间和地域内HIV的变异是相对稳定的,会出现具有不同特点的地区性代表毒株.疫苗的设计应该与使用疫苗地区的毒株流行趋势联系起来.中国目前流行的HIV-1毒株主要是印度B亚型和泰国C亚型,而B亚型的变种B'亚型和C亚型重组的毒株B'/C亚型在中国的流行呈迅猛增加之势.为研究适合于中国的疫苗,该研究以中国的流行株B'/C亚型为基础来研制侯选疫苗.表达HIV-1合成基因gagpolnef重组痘苗病毒疫苗株的构建是将质粒pCR-Script-c-clade-syngpnef用KpnI酶切获得合成基因部分syngpnef,将其插入到转移载体pVI75的相应酶切位点构建转移质粒pVI75-syngpnef,再将质粒pVI75-syngpnef与痘苗病毒天坛株共感染鸡胚成纤维细胞,经过两轮筛选获得重组病毒疫苗株.第一轮筛选加G418选择压力,挑选蓝斑.在G418压力下经三代噬斑纯化,获得病毒基因组上既有目的基因又带标记基因的发生第一次同源重组的痘苗病毒;第二轮筛选去除G418压力,挑选白斑,经三代纯化获得病毒基因组上只有目的基因、不带标记基因,发生了第二次同源重组的痘苗病毒.筛选得到的阳性重组病毒经PCR、Dot Blotting检测标记基因已经删除,目的基因被整合到病毒基因组上;Western Blotting也检测到目的基因的融合表达.表明已成功构建表达HIV-1合成基因gagpolnef的重组痘苗病毒疫苗株,为研制具有自主知识产权的HIV疫苗提供了候选疫苗.

作者：

周小云

展开 >

关键词：

人免疫缺陷病毒痘苗病毒载体合成基因重组痘苗病毒疫苗

授予学位：

硕士

学科专业：

生化与分子生物学

导师：

饶力群、邵一鸣

学位年度：

2003

学位授予单位：

湖南农业大学

语种：

中文

中图分类号：