摘要
该实验根据已发表的狂犬病病毒ERA株G基因序列,设计了九对引物,运用RT-PCR的方法分别扩增出了G基因全序列和G基因的八个部分片段,即G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8.将全G基因和G基因的八个片段分别克隆到PMD18-T克隆载体上,用EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ酶切pMD-G1、pMD-G3、pMD-G5、pMD-G7,用BamH Ⅰ/Pst Ⅰ酶切pMD-G2、pMD-G4、pMD-G6、pMD-G8,用EcoRⅠ/Pst Ⅰ酶切pMD-G和杆状病毒表达载体PAcSG2,回收纯化目的片段.将G基因与PAcSG2连接,G1、G2与PAcSG2连接,G3、G4与PAcSG2连接,G5、G6与PAcSG2连接,G7、G8与PAcSG2连接,构建了重组杆状病毒转移载体PAc-G和重组杆状病毒缺失突变转移载体PAc-G1G2、PAc-G3G4、PAc-G5G6、PAc-G7G8.每一株均缺失104个氨基酸,缺失部位从第21位氨基酸开始,至第437位氨基酸.设计了另一对引物,以构建好的重组杆状病毒转移载体质粒为模板,运用PCR的方法分别扩增出了目的基因G和G1G2、G3G4、G5G6、G7G8.分别将之克隆到PMD18-T克隆载体上,用EcoR Ⅰ/BstxⅠ酶切后,纯化回收目的片段.
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