摘要
探讨锌指蛋白KLF4 mRNA在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中表达的变化,了解其在子宫内膜癌的早期诊断,病情监测中的意义,为子宫内膜癌的治疗和预后评估提供实验和理论依据.方法:采用半定量的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测37例子宫内膜癌组织(研究组)KLF4 mRNA的表达强度,以26例正常子宫内膜组织作为对照(对照组).取子宫内膜癌组织标本37例,均经病理切片证实.按照1988年国际妇产科联盟(FIGO)的手术病理分期标准,Ⅰ期19例,Ⅱ期10例,Ⅲ期8例;病理分级G1级18例,G2级14例,G3级5例.另取26例正常子宫内膜组织作为对照,系因子宫肌瘤而手术并经病理切片证实为良性的子宫内膜组织,且半年内未服用过激素药物.所有的标本均于手术后置液氮中贮存.按Trizol(GIBC0/BRL)试剂盒说明书操作提取组织总RNA,按Superscript Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis(Gibco/BRL)试剂盒说明书要求的标准条件合成cDNA第一链.PCR反应在25μl的反应体系中进行,用β-actin作为内参照以标化不同的反应,将其引物与KLF4的引物同时加入到PCR反应体系中.PCR扩增的反应条件为94°C预变性3min,继而94°C 40s,58°C 30s,72°C 40s,28个循环,最后72°C延伸7 min.PCR产物在含有溴化乙啶的琼脂糖凝胶中变性分离,电泳图像在成像仪Fluor-s MultiZmager(Bio-Rad)上扫描后,用Multi-Analyst软件包(Bio-Rad)确定KLF4和β-actin条带的密度比值,通过比较KLF4和β-actin条带的密度比值以确定组织中KLF4 mRNA的表达.结论:在子宫内膜癌组织中,KLF4表达下调,并由此可促进细胞过度增殖,而且KLF4 mRNA的表达水平与子宫内膜癌的临床分期和病理分级呈负相关,提示KLF4可能参与了子宫内膜癌的发生和进展过程.
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