黄瓜抗病基因同源序列的克隆及其对霜霉病抗病基因标记的研究

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中文摘要：由古巴假霜霉菌(Pseudoperonospora cubensis Rostow)引起的黄瓜霜霉病(Downymildew)是当前严重影响黄瓜生产的主要病害之一,1868年首次被发现,近年来日趋严重.防治霜霉病可采取喷施杀菌剂和高温闷棚等措施,但根本途径是培育抗霜霉病的黄瓜优良品种.克隆和标记黄瓜霜霉病抗病基因,则是当前利用分子技术进行抗病育种工作的基础.该试验采用基于抗病基因同源序列(Resistance gene analog,RGA)克隆和标记基因的策略,主要进行了以下3方面的研究:(1)依据抗病基因的NBS保守域设计简并引物,从黄瓜基因组DNA中克隆RGA;(2)构建黄瓜抗感霜霉病分离群体,并用于从上述克隆到的RGA中筛选黄瓜霜霉病抗病基因的连锁标记;(3)利用获得的黄瓜RGA分析黄瓜的种质资源,考察RGA在黄瓜抗病种质资源上的聚类分析效果.该试验在实验方法上有所创新.首次采用PCR-PAGE方法对RGA的克隆进行分类,与四碱基酶切分类方法相比较,该方法能够全面分析待测的克隆核苷酸序列,PCR扩增不受载体序列干扰、无需酶切鉴定可以直接去除非重组克隆,同时还可以对重组克隆进行是否为目的片段克隆的PCR验证.该方法在对电泳谱带的分析上也比较简便,只需对目的电泳带进行长度的归类,借助图象扫描分析软件可轻易完成.综上所述,该试验证实了NBS类型RGA在黄瓜基因组中广泛存在,并与甜瓜RGA有较高同源性;该试验还初步验证了黄瓜RGA同某些抗病基因之间可能存在的连锁关系;该试验还首次尝试使用RGA的特异引物分析植物品种间的遗传关系,初步证明黄瓜RGA对抗病种质有一定的标示作用.

作者：

丁国华

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关键词：

黄瓜抗病基因同源序列霜霉病分子标记种质资源

授予学位：

博士

学科专业：

蔬菜学

导师：

秦智伟

学位年度：

2004

学位授予单位：

东北农业大学

语种：

中文

中图分类号：