摘要
该论文主要报道:应用分子生物学实验方法从5种鱼类和水螅中克隆核糖体蛋白L15的完整cDNA,从黑斑蛙和鹌鹑中克隆RPL15的cDNA片段,从斑马鱼卵巢获得dmrt1基因的两个选择性剪接体的完整克隆;并应用生物信息学方法对这些序列进行分析;首次对rpl15基因编码区作为一种新的分子标记在真骨鱼类系统发育研究中的价值进行评估;检测dmrt1两个不同剪接体在斑马鱼成体和胚胎发育中的表达特征,分析基因功能.Ⅰ应用RT-PCR和3′-RACE方法,分别从3种鲟鱼——中华鲟(Acipenser sinensis)、施氏鲟(Acipenser schrenckii)、俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedtii),鲇鱼(Silurus asotus),斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)和水螅中首次克隆了核糖体大亚基蛋白L15(RPL15,ribosomal protein L15)的完整cDNA,从两栖类的黑斑蛙(Rana nigromaculata)和鸟类的鹌鹑(Coturnix coturnix japonica)中首次克隆了RPL15的cDNA片段(编码区的大部分),并详细分析了其序列特征.Ⅱ应用RT-PCR、3′-RACE和5′-RACE方法,结合电子克隆,成功地从斑马鱼(Danio rerio)卵巢获得了dmrt1基因的两个选择性剪接体,其中较小的剪接体系首次克隆.随后又通过RT-PCR从斑马鱼卵巢cDNA扩增出这两个剪接体包含完整阅读框的序列,证实了这两个选择性剪接子在斑马鱼卵巢中的存在.测序结果显示:两个剪接体长度分别为1060和918个核苷酸;推测它们分别由5个和4个外显子组成;它们的5′端和3′端序列完全相同,差别在于小剪接体比大剪接体在阅读框靠近3′端的地方少了142个核苷酸,而这一段恰好是大剪接体中推测的第4个外显子.两个剪接体分别包含一个804个核苷酸和一个573个核苷酸的完整阅读框,推测分别编码一个267个氨基酸和一个190个氨基酸的蛋白.
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