摘要
马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)是反转录病毒科慢病毒属成员之一,在基因组结构和抗原性上与人艾滋病病毒(HIV)十分相似,可以引起马属动物的一种急性烈性传染病,以贫血、持续感染、反复发热为特征,是马属动物最重要的传染病之一.中国的马传贫驴白细胞弱毒疫苗是迄今为止唯一大规模应用的慢病毒疫苗.马传贫弱毒疫苗致弱路线是:将一株来源于马体的EIAV超强毒力毒株LN经过驴体连续传代100余代使病毒毒力增强后获得了驴强毒株DV(对马和驴均100%致死),然后将DV株连续通过驴白细胞进行体外培养驯化,使得病毒毒力完全丧失,而保持了良好的免疫原性,最终培育成功EIAV驴白细胞弱毒疫苗DLA(沈荣显等,1979),DLA进一步通过驴胎皮肤细胞培养驯化,获得了皮肤细胞弱毒疫苗株FD.该试验利用中国拥有的马传染性贫血病毒疫苗培育系统(由强毒到弱毒的不同代次病毒),将保留的不同代次病毒体外接种健康驴白细胞培养物进行复壮,待感染驴白细胞出现CPE后,一定时间内收获病毒,提取其前病毒DNA,以套式PCR方法分别扩增不同代次病毒非编码区5LTR和3LTR基因片断,以双脱氧法测定不同代次病毒的核苷酸序列.结合EIAV致弱过程中病毒生物学特性的变化,并参照已测定的马传贫病毒毒株的序列及已构建的几个不同毒力和细胞嗜性的感染性分子克隆序列,发现在EIAV疫苗致弱过程中几处与病毒毒力变化相关的基因变异位点,即在强弱毒中E-box基序表现出一定的差异,且R区TAR结构、转录起始碱基及Poly(A)附加位点亦发生规律性的改变,同时在中国EIAV增强子区发现新的特异性细胞转录因子结合基序GATA盒子.通过对不同代次病毒LTR序列分析,将病毒致弱的基因变异位点锁定在有限范围之内,为我们明确毒力变化与基因变异之间的相关性,在分子致病机理和免疫保护机制方面的研究奠定重要的病毒分子生物学基础.
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