摘要
水稻橙叶病(Rice orange yellow leaf disease)是导致水稻局部地区严重经济损失的病害之一.近年来,在东南亚和中国的华南一带均有发生,且有扩大的趋势.该病的病原物经证实为植原体(Phytoplasma),在水稻的整个生育期都有发生.该文以采自广东省茂名市的信宜、高州、电白、从化等县市的显症水稻病株为材料,抽提总核酸为模板,采用植原体通用引物sP1、sP2进行PCR扩增克隆病原物保守的16SrRNA基因的一段序列,扩增得到一条558bp的条带,经克隆序列分析表明该片断和许多植原体的同源性高达95%以上.说明利用该植原体通用引物扩增得到的是水稻橙叶病病原物的序列.利用此引物并优化反应条件,建立了水稻橙叶病的PCR检测方法,该方法能够特异、灵敏、有效的检测发生在水稻上的水稻橙叶病病害.对该方法检测的灵敏度进行了分析,发现该方法能够检测到相当于50ng病稻组织中的病原物,并且从水稻的各部分组织中均能够检测到病原物.该试验还比较了不同的DNA抽提方法,发现2%CTAB法是有效的方法,抽提的DNA用于PCR检测,结果准确,灵敏.试验中利用此检测体系检测从广东信宜、高州、从化采集的多份样品,结果表明,在这几个地区均有水稻橙叶病危害.该研究还从基于DNA直接测序分析植原体分类基础上探索了水稻橙叶病病原物在植原体属内的分类地位.采用引物对P1、P7,以显症的水稻病株抽提的总核酸为模板,进行PCR扩增克隆该病原物的保守的16SrRNA基因近全长序列及其相邻的间隔区的序列,结果表明,得到一条约2kbp的目的条带,测序结果与国内外已发表的植原体保守的16SrRNA基因序列逐一比较,经过分析发现,该病原物与AAY亲缘关系比较近,同属翠菊黄化组(Asteryellows group)(16SrI).
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