从广东南海、三水、肇庆等番鸭饲养密集地区收集的番鸭花肝病病料,经细菌分离鉴定,病毒分离、动物回归及回归试验动物的病原再分离等试验,确认番鸭花肝病是由病毒引起的一种疫病.从20份病料中,分离得到6株能单独引起明显临床病变的番鸭花肝病病毒,同时在13份病料中分离出禽流感病毒,其中9份含H5亚型、6份含H9亚型禽流感病毒,表明生产实践中,花肝病毒与禽流感病毒有混合感染或继发感染的临床表现.对分离到的花肝病毒进行形态学、生物学特性方面研究.以1/15 mol/L pH7.2含NaCI浓度为8%的PB缓冲液配制含1%琼脂糖的琼脂做琼脂扩散检测效果最佳,对番鸭花肝病毒(MDMLV-GD6株)提纯抗原和兔抗番鸭花肝病毒抗体的最低检出量分别为0.15mg/mL和0.05mg/ml.琼脂扩散对感染番鸭花肝病毒死亡的雏番鸭肝、脾、番鸭胚胎尿囊膜、尿囊液等经过处理得到的抗原检测均呈阳性,但检测不到康复番鸭、商品番鸭或经过番鸭花肝病毒灭活油乳剂疫苗首免或二次免疫番鸭的花肝病毒琼扩抗体,兔抗MDMLV IgG不与GPV、MPV、NDV、AIV发生交叉反应.应用5μg/mL番鸭花肝病毒(MDMLV-GD6株)差速离心抗原包被酶标板,4℃过夜,0.5%BSA PBST封闭45min,被检血清做1:80稀释,作用60min,加入1:1000稀释兔抗番鸭IgG,作用45min,再加入1:1000稀释山羊抗兔酶标抗体,作用45min,最后加入底物常温避光作用5min,能够快速、灵敏的鉴定番鸭花肝病毒阴阳性血清,特异性及重复性良好.分别用灭活的番鸭花肝病毒(MDMLV-GD6株)制备单价灭活油乳剂苗;灭活番鸭花肝病毒(MDMLV-GD6株)、鸭源H5-AIV、鸭源H9-AIV经适当比例混合制备二联灭活油乳剂苗.对两种疫苗的安全性、物理性状、保存期、免疫效力进行检测.
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