摘要
逆境胁迫严重影响到植物的生长,提高植物抗逆性的研究因而有着极为重要的现实意义.紫花苜蓿(Medicago sativa L.)是当今世界上种植面积最大,应用最广泛的多年生豆科牧草.借助植物基因工程手段提高苜蓿抗逆性是现代育种的重要途径.本文利用农杆菌介导法,将从盐生杜氏藻(Dunaliella salina)中克隆到的抗逆基因Dscbr(编码一种早期光诱导蛋白)转入紫花苜蓿中,提高其抗逆性.首先以再生能力强的"中苜一号"苜蓿品种作为受体材料,以叶片作为外植体接种于UM+2,4-D(2.0mg/L)+KT(0.25mg/L)培养基上,经愈伤组织诱导、胚状体分化、生芽和生根培养,形成了完整的再生植株,建立了适合于遗传转化操作的苜蓿再生系统.为了提高转化效率,利用植物表达载体pCAMBIA2301G中的GUS基因进行转化条件的优化,经GUS组织化学染色、抗性愈伤组织分析其转化条件为:叶片预培养4-5d,用农杆菌菌液(OD<,600>=0.3~0.8)侵染20min,然后在培养基上铺一层灭菌滤纸共培养7d后清洗.在此基础上将Dscbr基因构建到植物表达载体pCAMBIA2301G中,采用冻融法转化到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105中.在Km 15mg/L选择压下,采用前期和后期筛选的方法,经过120d后获得了52株转化过的再生苗.最后对再生苗进行分子生物学检测,用快速小量法提取莒蓿总DNA,PCR检测出4棵阳性苗,转化率为7.7%.经RT-PCR检测,发现有1棵转基因苜蓿苗中的Dscbr基因转录出相应mRNA.本文为利用转基因技术提高紫花苜蓿抗逆性的研究提供了经验.
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