摘要
雷公藤内酯醇的毒副作用呈剂量相关性.我们认为,寻求与其具有协同或相加作用的抗癌药物联合应用,可降低雷公藤内酯醇使用剂量而减轻其毒副作用.本课题采用6种白血病细胞株(K562、K562/ADM、HL60、U937、CA46、MOLT-4)检测雷公藤内酯醇和阿霉素、高三尖杉酯碱、阿糖胞苷、长春新碱、羟基脲联合应用的抗癌活性.结果表明,雷公藤内酯醇与临床常用抗癌药联合应用,具有单纯相加甚至加强的协同杀伤效果,尤以和阿霉素、高三尖杉酯碱及阿糖胞苷联合应用时更为显著.本课题对雷公藤内酯醇的半数致死量进行了测定并对荷瘤裸鼠实施了联合用药治疗.应用昆明小鼠,以bliss法计算半数死亡剂量(LD50)及其95%可信限为1.03(0.87-1.13)mg/kg.抗裸鼠移植瘤实验表明,联合应用雷公藤内酯醇和阿霉素,较低的用药剂量即能达到较高单一用药剂量的治疗效果.单用高剂量的雷公藤内酯醇(30μg/kg),可出现脏器损害,尤以肝脏受损为著.低剂量(5μg/kg)雷公藤内酯醇与1mg/kg阿霉素联合用药时,对脏器的损害轻微,未见明显的病理改变,而疗效不亚于高剂量单独用药.研究结果证实,雷公藤内酯醇和阿霉素具有协同抗白血病细胞增殖的作用.联合用药具有减低毒性,提高疗效的优点.本课题对雷公藤内酯醇的抗白血病机制进行了研究.HL60细胞经雷公藤内酯醇作用24小时,其Bcl-2和突变型P53蛋白表达均显著下降,mRNA水平也发生相应改变,同时Caspase-3和Bax蛋白表达升高,提示雷公藤内酯醇抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,可能通过下调其bcl-2和突变型p53 mRNA表达及阻断形成相应蛋白产物并激活Caspase-3而发挥作用.对信号转导的研究发现,经雷公藤内酯醇处理24小时,HL60细胞MEK-1和c-Jun蛋白表达明显减少,并呈量效关系.提示雷公藤内酯醇可通过下调Ras/Raf/MEK/Erk途径的信号转导,最终减少核转录因子c-Jun的含量而抑制细胞的增殖.综上所述,雷公藤内酯醇和多种抗癌药物具有协同作用,并能逆转白血病细胞的耐药性.其抗癌机制可能是通过抑制癌细胞bcl-2和突变型p53 mRNA的表达及阻断形成相应蛋白产物并激活Caspase-3而发挥作用.雷公藤内酯醇还可通过下调Ras/Raf/MEK/Erk途径的信号传导,最终减少核转录因子c-Jun的含量而抑制细胞的增殖.针对bcl-2基因的siRNA,能明显抑制HL60细胞增殖,诱导细胞凋亡,并能提高白血病细胞对雷公藤内酯醇的敏感性.本课题研究结果对减低雷公藤内酯醇的毒性,提高其抗癌活性具有实用意义.
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