摘要
目的为了解马麝朊蛋白基因结构特征和其细胞型朊蛋白的性质,以填补国内外对马麝朊蛋白基因研究的空白,并为进一步研究马麝朊蛋白结构特征和动物朊病毒病传染的种间屏障机制提供实验材料和理论依据,本研究准备对马麝朊蛋白基因进行克隆及其原核表达.结果序列分析表明,4个马麝朊蛋白基因的完整编码区均为包含在单一外显子内完整开放阅读框,其全长为771bp,含5个短而富含G-C的元件,可编码5个八肽(九肽)重复Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln或Pro-Gln/His-Gly-Ala/Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln及24个氨基酸的N-端信号肽和23个氨基酸的C-端信号肽.所构建的马麝重组朊蛋白(85~233)原核表达载体pGEX-MuPrP(85~233),经转化E.coli BL21(DE3),成功地获得重组表达菌E.coli GST-MuPrP(85~233),可表达预期大小约为42.4 ku的融合蛋白.在诱导表达优化条件下,该重组菌可产生表达量占细菌总蛋白量30%以上的融合蛋白.免疫印迹检查,融合蛋白GST-MuPrP(85~233)可与抗牛单克隆抗体4C11反应,各氨基酸突变并不影响单抗4C11的识别表位.
NETL