摘要
急性淋巴细胞白血病(ALL)是血液系统常见恶性疾患之一，B细胞性ALL(B-ALL)占ALL的70-80％，在儿童恶性血液病中尤为多见。目前成人ALL的疗效较差、生存期短，单独应用联合化疗方法难以取得满意的疗效，需要结合骨髓移植、生物治疗及免疫治疗等手段进行综合治疗。研究表明，ALL白血病细胞表面免疫共刺激分子B7.1表达低下或缺乏，是导致白血病细胞不能被机体细胞毒性T细胞(CTL)有效地识别杀伤，从而逃逸宿主免疫监视的重要原因之一。然而，几乎所有的B-ALL病例均表达CD19表面抗原。因此，可以利用CD19表面抗原作为ALL白血病细胞的表面标记，构建抗人CD19单链抗体(scFv)-B7.1融合基因、表达融合蛋白，通过融合蛋白中抗人CD19scFv，将B7.1结合到ALL白血病细胞表面，刺激肿瘤特异性CTL细胞活化，从而起到杀伤白血病细胞的作用。 通过流式细胞仪检测，发现在一个EB病毒感染的白血病患者的骨髓单个核细胞中表达CD80(B7.1)抗原。我们应用RT-PCR技术成功克隆其cDNA编码区序列。基因测序显示序列正确。 在此基础上，利用(人血清白蛋白)HSA的D3区中不含半胱氨酸且极性较高的一段基因序列作为连接肽，将抗人CD19单链抗体及人类细胞表面抗原CD80基因分别经酶切、纯化后以两种不同的组合方式克隆至原核表达载体PET22b(+)中，经IPTG诱导，在大肠杆菌内获得了融合蛋白的分泌性表达。两种融合蛋白的成功构建与表达，为下一步探讨血液肿瘤的免疫治疗机制奠定了基础。
NETL