利用不同策略获得抗SCMV转基因玉米的研究

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中文摘要：玉米矮花叶病(MDM)是世界性病害，在我国主要由甘蔗花叶病毒(SCMV)的MDB株系(SCMV-MDB)引起。本研究通过采用不同的策略，获得了高抗SCMV转基因玉米。先构建了无标记基因的SCMV-MDB复制酶基因NIb的反向重复序列(SCMVirNIb)表达载体pSCMVirNIb。通过冻融法将pSCMVirNIb载体与抗除草剂标记基因(bar)载体分别导入农秆菌LBA4404，然后共转化玉米幼胚。通过除草剂梯度筛选，获得了Z3自交系再生苗，其中14株的标记基因和目的基因PCR扩增均呈阳性，目的基因DNA点杂交亦呈阳性。　　构建了SCMV-MDB的外壳蛋白基因(cp)和改造过的Bt毒蛋白基因(crylacm)的双价表达载体pCr-Cp，农杆菌介导转化玉米自交系Z31，获得了再生苗。根据叶片涂抹除草剂抗性鉴定和cp基因及crylacm基因PCR检测结果，在冬季于温室种植7个T1代株行。对T1代人工接种SCMV，各株行均有抗、感株分离。T2代共种12个株系，人工接病、接虫，鉴定双抗性。结果T2代的12个株系均尚在分离，其中1个株系的双抗株率高于50％。其双抗株的cp基因和crylacm基因PCR检测均呈阳性，Bt毒蛋白试纸条检测，2株的检测线比较明显，表明Bt毒蛋白得到了表达。即获得了兼抗玉米螟的抗SCMV转基因玉米。　　构建了无标记基因的SCMV-MDB反义cp基因表达载体pACP，农秆菌共转化玉米自交系Z3的幼胚，得到了再生株。T1代人工接种SCMV，有2个株行的抗病株率高于70％。PCR检测抗病株，其中1个株行有2株cp基因阳性而标记基因阴性，获得了无标记转反义cp基因抗病株。　　

作者：

白云凤

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关键词：

转基因玉米 dsRNA 无标记基因双抗甘蔗花叶病毒玉米矮花叶病农杆菌

授予学位：

博士

学科专业：

遗传学

导师：

王国英

学位年度：

2004

学位授予单位：

中国农业大学

语种：

中文

中图分类号：

Q94