摘要
本研究以具有重要经济价值的淡水虾类-罗氏沼虾作为研究对象，从35℃热诱导后的中枢神经和肝胰腺两种组织中分别克隆到两种热休克蛋白70s基因，命名为Mar-HSC70和Mar-HSP70。氨基酸序列比对分析表明它们和其他物种HSP70s有很高的同源性，故确定它们属于HSP70家族成员。研究中发现Mar-HSC70和Mar-HSP70氨基酸序列最主要的差别在于Mar-HSP70N-末端和C-末端分别有60和14个氨基酸残基的缺失，而这种缺失经过多次测序得以确认。基因组结构分析表明这两种HSP70s均不含有内含子结构。运用Northernblotting、westernblotting和半定量RT-PCR分子生物学手段，从mRNA和蛋白两种水平上分析了Mar-HSC70和Mar-HSP70在冷热休克、重金属诱导以及细菌侵染情况下它们的表达特征。 为了进一步分析这两种分子在胞内的表达情况，我们采用原位杂交和免疫组织化学在中枢神经和肝胰腺两种组织中进行了表达定位研究。 为了进一步探讨罗氏沼虾这种诱导型Mar-HSP70的功能，我们构建了Mar-HSP70-pET-28a(+)原核表达系统，成功地表达了Mar-HSP70，发现在IPTG诱导5hr后，目的蛋白可达到细菌总蛋白的50％以上，同时通过免疫印迹技术证明了这种蛋白的免疫原性，而且通过优化条件，采用低温诱导，获得了一定量可溶性Mar-HSP70。在Mar-HSP70功能分析中，我们建立了Mar-HSP70的活性检测系统，在E.coliBL21(DE3)导入这一基因并诱导表达，发现能够提高热刺激后细菌的生存率，这说明Mar-HSP70在一定程度上起到了对细菌的保护作用，这为诱导型HSP70s功能研究提供了很好的模型和思路。
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