摘要
以近年从浙江、四川等地分离到的鸡传染性支气管炎病毒肾致病型毒株以及传统的IBV经典毒株为材料，设计特异性引物，分别克隆了IBV的S1基因和N基因并测定序列，用DNAstar等软件进行分析。S1基因和N基因的序列比较显示，国内分离到的部分毒株间同源性最高(82.9％到98.6％)，但它们与传统的毒株相比同源性较低。在分离株的S1基因和N基因序列中均发现了大量散在的点突变，而且在SC021202株和J株的S1基因中发现一段长21nt的插入片段，在以前的毒株中不存在。这些特征显示国内近年流行的一些IBV毒株是新的变异株，有着相对独立的起源和进化方向。 在大肠杆菌pBAD/his系统中表达了IBV的N蛋白，表达量约占菌体总蛋白的20％。同时在大肠杆菌pGEX表达系统中高效表达了IBVS蛋白的S1F表位片段和S1D表位片段。大肠杆菌中表达的N蛋白和S1蛋白均可与IBV多抗血清发生特异性反应，并通过Ni+柱纯化出了表达的外源蛋白。此外，还将IBVS1基因构建到酵母表达载体pPICZαB中，电转化酵母X33菌株，得到四个阳性克隆，经甲醇诱导可分泌型其中三株可表达IBV的S1糖蛋白，表达的蛋白可与多抗血清发生特异性反应。 以纯化到的N蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法(N-ELISA)，可以检测出鸡血清中的抗IBVN蛋白的特异性抗体。 以纯化的N蛋白、S1D蛋白、S1F蛋白分别免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术制备除了8株抗N蛋白的单克隆抗体、3株抗S1D蛋白的单克隆抗体、6株抗S1F的单克隆抗体。
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