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摘要
目的 探讨用限制片段差异显示聚合酶链反应(RestrictionFragmentDifferentialDisplay-PolymeraseChainedReaction，RFDD-PCR)技术建立基因差异表达谱的方法，及其应用于高通量分析人类疾病差异表达谱的可行性。初步分析比较乳腺肿瘤各阶段表达谱特征，筛选乳腺肿瘤侯选基因，为进一步研究提供线索。材料与方法采集乳腺癌根治术病人的乳腺癌组织、乳腺癌转移淋巴结及正常乳腺组织，用RFDD-PCR技术平行操作，获得三种组织全部转录组片段。然后以7％尿素变性聚丙烯酰胺电泳进行表达差异基因片段的分离、显示，结合http：//数据库资料，应用IMAGETOOL，ImageQuantTL等软件，对各组织间有表达差异的基因进行生物信息学分析，筛选乳腺肿瘤侯选基因。结果建立了乳腺癌组织、乳腺癌转移淋巴结及正常乳腺组织的基因表达谱，获得基因片段5407个，其中在癌组织和正常组织间有表达差异的片段为1491个，癌组织与转移淋巴结间的差异片段有1176个，而转移淋巴结与正常组织间的差异片段为1462个，分别占表达数的40.9％，33.9％，39.6％。经差异片段的生物信息学分析，已筛选出部分乳腺癌侯选基因所对应的条带，包括新的乳腺肿瘤相关基因，如PPARA，BCL11B等，以及可能为新基因/EST的候选片段，有待进一步研究证实。结论RFDD-PCR技术可以检测出大量表达基因，并同时比较三种或三种以上样本的表达差异，尤其适用于人类疾病差异表达谱分析，对疾病相关基因做初筛，获得较全面的肿瘤侯选基因，为下一步研究打下基础。同时，除通过差异比较筛选疾病1候选基因外，还有可能找到新基因或EST。
关键词
差异表达谱/肿瘤侯选基因/限制片段差异显示/聚合酶链反应/基因差异表达谱/人类疾病差异表达谱/乳腺肿瘤引用本文复制引用
授予学位
博士学科专业
人体解剖与组织胚胎学导师
羊惠君学位年度
2004学位授予单位
四川大学语种
中文中图分类号
R73